凋亡蛋白融合基因与报告基因pECFP-C1的构建 及其稳定表达细胞系的建立.pdf

业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14 (1) 1~6 ·研究论文· 凋亡蛋白融合基因与报告基因pECFP- 的构建 及其稳定表达细胞株的建立 1,3 2 3 士泽 张忠芳 张玉静 * (1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319; 2. 北华大学医学院，吉林 1320 13; 3. 解放军军需大学生物化学教研室，长春 130062) 摘要：利用PCR 方法扩增凋亡蛋白融合基因片段，克隆至pMD18-T 载体，鉴定和测序正确的凋亡蛋白融合基因亚克隆入 带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pECFP- 的多克隆位点 R 域之间，成功地构建带有报告基因的凋亡蛋白融合 基因真核重组表达载体pECFP- - 。将带有报告基因的凋亡蛋白融合基因真核表达载体应用脂质体介导使其转染中国仓 ，对转染的 应用 鼠卵巢细胞株(CHO) ，于转染48 h 后在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的出现 CHO 细胞， Trizol 法提取 RNA ，经RT-PCR 鉴定，转染细胞在750 bp 处出现目的条带。收集转染细胞上清，应用间接ELISA 及Western blot 检测到目的 蛋白的表达，说明凋亡蛋白融合基因构建正确。转染凋亡蛋白融合基因重组质粒的细胞，长成单层后传代，经G4 18(Geneticin) 加压筛选(800 滋g/mL) ，3 周后在荧光显微镜下观察所有细胞均出现绿色荧光，说明已建立了能够稳定表达凋亡蛋白融合基因 与报告基因pECFP- 的细胞株，为进一步研究凋亡蛋白融合蛋白在肿瘤组织中的定位及其诱导肿瘤细胞凋亡打下了基础。 关键词：凋亡蛋白融合基因；报告基因pECFP- ；CHO 稳定表达细胞株 中图分类号: S188 文献标识码: A 文章编号: 1006-1304(2006)01-0001-06 Construction of Apoptin Fusion Gene and Reporter Gene pECFP- and the Establishment of Their Stable Expression Cell Strains 1,3 2 3 LI Shi-Ze ZHANG Zhong-Fang ZHANG Yu-Jing * The apoptin fusion gene was cloned and the clone vector pMD-18T- was cons