酶工程课后题.docVIP

酶工程课后答案 1、RNA的生物合成——转录：（1）转录的起始（2）RNA链的延伸（3）RNA链合成的终止（4）RNA前体的加工蛋白质生物合成——翻译：（1）氨基酸活化生成氨酰—tRNA（2）肽链合成的起始（3）肽链的延伸（4）肽链合成的终止（5）蛋白质前体的加工3、如何控制微生物发酵产酶的工艺条件？?细胞活化与扩大培养：选育得到的优良的产酶微生物必须采取妥善的方法进行保藏。常用的保藏方法有斜面保藏法、沙土管保藏法、真空冷冻干燥保藏法、低温保藏发法、石蜡油保藏法等，可以根据需要和可能进行选择，以尽可能保持细胞的生长、繁殖和产酶特性 培养基的配制：在设计和配制培养基时，首先要根据不同细胞和不同用途的不同要求，确定各种组分的种类和含量，并要调节至所需的PH，以满足细胞生长、繁殖和新陈代谢的需要。PH的调节控制：培养基的PH与细胞的生长繁殖以及发酵产酶关系密切，在发酵过程中必须进行必要的调节控制。温度的调节控制：细胞的生长、繁殖和发酵产酶需要一定的温度条件。在一定的温度范围内，细胞才能正常生长、繁殖和维持正常的新陈代谢。溶解氧的调节控制：细胞的生长、繁殖和酶的生物合成过程需要大量的能量。为了获得足够多的能量，细胞必须获得充足的氧气，使从培养基中获得的能源物质（一般是指各种碳源）经过有氧降解而生成大量的ATP4、动植物细胞培养产酶有何特点？植物：1.提高产率2.缩短周期3.易于管理、减轻劳动强度4.提高产品质量5.其他动物：1.细胞生长速度慢（需添加抗生素）2.细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感3.反应过程成本高，产品价格贵4.细胞具有锚地依赖性5.原代细胞一般繁殖50代5、简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。操作—上样：上样体积不十分严格。洗脱：增加溶液的离子强度。梯度洗脱法：改变溶液的pH。再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/L NaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。操作—凝胶的选择和处理：根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质。?将干胶悬浮于5-10倍的蒸馏水中?，充分溶胀，抽气，装柱。柱的选择：采用L/D比值高的柱子，可提高分辨率，但影响流速。加样：体积不能过多，不超过凝胶床体积的5％，脱盐时可在10％左右。洗脱：洗脱液与平衡时用的buffer一致。洗速不可过快，保持恒速。胶的保存：洗脱完毕后，凝胶柱已恢复到上柱前的状态，不必再生处理。亲和层析原理:利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯。6、简述双水相萃取和超临界萃取的概念与特点双水相萃取：又称水溶液两相分配技术.两种不相溶的亲水性高分子聚合物水溶液。由于形成的两相均有很高的含水量，故称“双水相”系统。优点：每一水相中均有很高的含水量，为酶等生物物质提供了一个良好的环境；PEG、Dextran和无机盐对酶等无毒害作用，不会引起变性。超临界萃取：利用欲分离物质与杂质在超临界流体中的溶解度不同而达到分离的一种萃取技术。优点：萃取率和反萃取率高;分离浓缩同时进行，溶剂可反复利用;解决胞内酶在非细胞环境中迅速失活问题;破壁功能，直接从完整细胞提取酶蛋白;成本低.7、简述凝胶电泳的分类及其原理？琼脂糖凝胶电泳：一般用于核酸的分离分析。琼脂糖凝胶孔径度较大，对大部分蛋白质只有很小的分子筛效应。聚丙烯酰胺凝胶电泳：可用于核酸和蛋白质的分离、纯化及检测。分辨率较高。8、何谓大分子结合修饰？有何作用？定义：是目前应用最广的酶分子修饰方法。利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法。作用：1提高酶活力2增加酶的稳定性3降低抗原抗体反应9、何谓固定化酶？经过固定化以后，酶的特性有哪些改变？固定化酶：固定在载体上，并在一定空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。稳定性：固相酶的稳定性比游离酶高，主要表现在：1热稳定性：固定化酶热稳定性较之天然酶提高。2对蛋白酶水解作用稳定性：固相酶比天然酶有更强的抵抗蛋白酶水解作用的能力。3对变性试剂作用的稳定性：?固相酶对各种蛋白变性剂的稳定性，一般都比天然酶强。4保藏稳定性：固相酶比天然酶保存的时间更长。最适温度：1?固相酶的最适温度一般比天然酶高，个别会有所降低2?同种酶，采用不同的方法或不同载体固定化后，其最适温度可能不同