连翘根醇提物体外诱导TE-13细胞凋亡机制及研究.pdfVIP

连翘根醇提物体外诱导TE-13细胞凋亡机制的研究 颜晰 赵连梅 单保恩 河北医科大学第四医院科研中心，河北省石家庄050011 目的：从基因及蛋白水平探讨连翘根醇提物(ethanolextractofForsythiasuspensaroot，FSEER)诱导人食管癌TE-13 细胞凋亡的作用机制。方法：采用流式细胞(Flowcytometry,FCM)检测不同浓度FSEER(0.4，0.5，0.6mg/ml)作用于TE-13 细胞24h后，线粒体膜电位的变化；采用免疫印迹技术(Westernblot)检测细胞凋亡相关蛋白 （caspase-3、caspase-8、caspase-9 和胞浆Cyt-c）在FSEER诱导TE-13细胞凋亡过程中的作用；通过RT-PCR方法检测0.4，0.5，0.6mg/mlFSEER作用于TE-13细胞 24h后，细胞凋亡相关基因Bax、Bad、Noxa、Bcl-2，Bcl-x(l)，Mcl-1的表达变化。结果：TE-13细胞经0.4，0.5，0.6mg/mlFSEER 作用24小时后，随FSEER作用浓度的增大，发生线粒体膜电位损伤的细胞数目逐渐增多，且明显高于对照组，差异具有统计 学意义(P＜0.01)；Westemblot分析结果显示，经FSEER处理后，TE-13细胞cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-9和胞浆Cyt-c 表达水平逐渐增加，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，而caspase-8表达水平没有明显变化，与对照组相比差异没 有统计学意义(P＞0.05);RT-PCR检测结果显示，FSEER可以上调TE-13细胞Bax，Bad,Noxa表达，下调Bcl-2，Bcl-x(l)，Mcl-1 表达。结论：FSEER可能是通过依赖于线粒体的细胞凋亡内源途径而诱导人食管癌TE-13细胞发生凋亡。 连翘；TE-13细胞；细胞凋亡 TheMechanismOfTE-13CellApoptosisInducedbyEthanolExtract ofForsythiaSuspensaRootinvitro YAN XiZHAOLianmeiSHANBaoen ResearchCenter,FourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang,HebeiProvince,China050011 OBJECTIVE:ToinvestigatetheprobablemechanismofTE-13cellapoptosisinducedbyFSEER invitro.METHODS:ChangesofmitochondrialmembranepotentialinTE-13cellwereexaminedbyFlow cytometry(FCM)aftertreatedwithdifferentconcentrationofFSEER(0.4,0.5,0.6mg/ml)for24h.Theeffects ofapoptosisassociatedprotein (caspase-3,caspase-8,caspase-9andCyt-c) inFSEER-inducedapoptosisof esophagealcancercellswereinvestigatedbyWesternblot.ThetranscriptionallevelsofBax,Bad,Noxa,Bcl-2, Bcl-x(l),Mcl-1inTE-13cellstreatedwithdifferentdoseofFSEER (0.4,0.5,0.6mg/ml) for24hweredetected byRT-PCR.Results:FSEER(0.4,0.5,0.6mg/ml) cansignificantlyreducedthemitochondrialmembrane potentialofTE-13cells.Withtheconcentrationincreasing,thenumberofcellswhosemitoehondrialmembrane potentialweredamagedgrewup,comparedwithcontrollgroup,thedifferencewassignificant(P＜0.01)