基因表达谱芯片对果蝇七氟醚麻醉及敏感相关基因的筛选与分析.pdfVIP

四川 大 学 学 医 学 版 ’ 2009 JSiehuanUniv (MedSciEdi) ；4。。～(5)：。934—936。 Med Edi 基因表达谱芯片对果蝇七氟醚麻醉及敏感 相关基因的筛选和分析 郭媛媛 。，阳 慧 ，程 剑 ，刘 进△ 1．四川大学华西医院 麻醉科 (成都 610041)；2．重庆医科大学附属第一医院 麻醉科 【摘要】 目的 采用基因表达谱芯片筛选果蝇七氟醚麻醉及敏感相关基因，并对其基因功能进行分析。方法 以七氟醚敏感、耐药和野生 品系黑腹果蝇为实验材料。将果蝇分为两组 ：七氟醚诱导组，包括三品系果蝇 (敏感 IS， 野生 IH，耐药 IR)；对照组(未经麻醉药干预)，包括三品系果蝇(敏感 S，野生 H，耐药 R)。采用基因表达谱芯片方 法 ，在各组各品系问进行 比较 ，筛选 出果蝇七氟醚麻醉及敏感相关基 因。结果 以IH 品系为对照，IS品系检测到 差异表达基因532个 ，IR品系 171个。其 中在敏感品系中参与糖类代谢过程的基因都下调表达 ，而在耐药品系都 上调表达。IS品系对 比S品系检测到差异表达基 因57个 ，IH品系对 比H品系检测到 13个 ，IR品系对 比R品系 检测到 12个。其 中有 16个基因在敏感 品系与耐药品系表达相反 。基 因FBgnO010388在各品系七氟醚诱导组都 上词表达。结论 三品系果蝇七氟醚诱导后在基因上确实存在差异，且敏感多于耐药品系；其中敏感和耐药品系 变化相反 的16个基因成为敏感相关基因的可能性较大 。敏感品系诱导组 比较对照组差异表达基 因数最多，野生 品系次之 ，耐药品系最少。FBgnO010388可能与七氟醚麻醉关系密切。 【关键词】 基因表达谱芯片 七氟醚麻醉 基 因 果蝇 【中图分类号】 Q343．1 近年来用基因分子生物学的方法对吸人麻醉药麻醉相 度[5](用压缩空气作为载气，气体流量调至 1L／min)对三品 关基 因进行筛选 、克隆 以及功能探讨 已成为揭示全麻药作用 系果蝇进行麻醉诱导，其浓度分别为 ：IS0．9％ ；IR 1．6％； 机理的重要研究 内容[1]。目前常选用较简单的生物模型，如 IH 1．3 ，加入麻醉药后2Omin，收集被麻醉果蝇 ，迅速放入 果蝇类等进行吸人麻醉药敏感基因研究 。 液氮，准备进行 RNA提取。 基因芯片是近年来逐渐发展起来 的高通量研究基 因差 1．2 果蝇总RNA提取 异表达的一种新 的技术手段 ，具有大规模 、高通量、快速简便 Trizol一步法分别提取两组三 品系果蝇 的总 RNA，再 等特点2【]。在前期研究中，我们使用基因芯片对七氟醚敏 进行纯化并行 甲醛变性胶电泳质检 (浓度为 1．6 g／L)。 感 、耐药品系黑腹果蝇和野生品系果蝇进行 了差异表达基因 1．3 基 因芯片方法筛选果蝇七氟醚麻醉敏感相关基因 的研究[3]，本实验中我们又进一步引入 了七氟醚诱导这一干 本实验使用 的是博奥生物有限公司的果蝇芯片 15k 预条件 ，用基因表达谱芯片方法在各组各品系问进行 比较 ， DrosophilaGenomeAtray，其覆盖了已知的果蝇基 因。对芯 来筛选果蝇七氟醚麻醉及敏感相关基 因，为其作用分子机理 片系统进行总体评价 ，各 质控指标均符合要求 。对样 品 研究提供新的靶点或思路 。 RNA进行荧光标记 、杂交与清洗及扫描。扫描后进行芯片 图像的采集与数据分析。每 品系都使用两张基因芯片即有 l 材料和方法 1次实验重复 。在各组各品系 问进行 比较 ，即每组都用敏感 1．1 实验动物及诱导方法 品系与野生品系比较及耐药品系与野生品系比较 ，筛选七氟 实验动物模型