包埋后免疫胶体金电镜样本制备技术探讨.pdfVIP

血压心肌胶体金颗粒定位于线粒体，背衬好，标记密度良好(图2)。样本9、10细胞： 胶体金颗粒定位于细胞内质网，背衬好，标记密度高。样本11、12小肠胶体金颗粒定位于 上皮细胞连接处，背衬好，标记密度良好。 3讨论 免疫电镜要求组织处理既要最大限度地保存抗原活性，又要兼顾超微结构的保存。因 此固定方法及包埋剂是电镜样本制作过程中对抗原活性及超微结构保存最关键的影响因 较低，但仍显示具有一定意义的特异标记。因此，两者在对耐受性大及抗原含量丰富的组 织仍可使用，特别是可做为肾脏活检免疫病理检查的一种替补方法和进行回顾性研究。两 者效果比较EPON812优于环氧树脂618。10例LRWhite低温包埋剂包埋的样本，免疫标 记的效果和超微结构保存明显好于前两者。LRWhite低温包埋剂为水溶性包埋剂，抗体易 于穿透与结合，文献报道该包埋剂聚合温度为50度或低温聚合。本文多次实验表明，在常 温下聚合12小时亦可获得良好的包埋效果，包埋块软硬适中，易切片，标记密度高，超微 结构清晰。最重要的环节是在聚合时要注意密封，不能有空气进入。 我们在实验中体会到：1样本要及时固定，否则会发生抗原漂移，影响定位。2如果条 件允许的话，最好以免疫前血清做对照(比较难买)。3如果在背影和信号不易区别的情况 下可进行如下调整①缩短一抗时间或降低孵育温度；②利用羊血清封闭；③二抗孵育时间 比一抗时间要短，背景总是二抗产生多(二抗浓度从推荐浓度1：20降至1：100)：④胶 体金要新鲜，否则会出现聚集等假阳性。⑤一抗浓度在包埋后法中需要高于免疫细胞化学 应用中的浓度，须在实验中根据观察结果进行调节。⑥抗体分装后应保存在4。C冰箱内， 不要冷冻，反复冻溶会影响抗原活性。 由于样本来源等多方面原因，本文无法对同一类样本进行比较，有待今后积累更多实 验数据，获得更客观的结论。 103 包埋后免疫胶体金电镜样本制备技术探讨 作者： 陈新宇， 易静， 张岚， 朱平 作者单位： 上海交通大学医学院 细胞生物学教研室 200211 本文读者也读过(7条) 1. 吴洪娟.王尊哲.周力 免疫电镜胶体金标记技术应用中关键环节的处理[期刊论文]-潍坊医学院学报2003,25(4) 2. 萨仁高娃.其木格.吴岩.Sarengaowa.Qimuge.WU Yan 胶体金免疫电镜技术及其应用[期刊论文]-内蒙古医学院学 报2007,29(5) 3. 李少玲.张向红.郝晶.武玉玲.高英茂 改良的免疫电镜胶体金技术[期刊论文]-山东医科大学学报2000,38(2) 4. 孔繁德.黄印尧.赖清金 免疫胶体金技术及其发展前景[期刊论文]-福建畜牧兽医2002,24(z1) 5. 李昕.李尧华.于顺.LI Xin.LI Yao-hua.YU Shun 锇酸固定组织的包埋后免疫电镜胶体金标记方法的改进[期刊 论文]-基础医学与临床2006,26(6) 6. 孔亮亮.张莉.张守臣.迟月明.张雅坤.金晓明 用K4M低温包埋剂和紫外线低温包埋机联合的免疫电镜法[期刊论 文]-哈尔滨医科大学学报2009,43(3) 7. 彭广东 鸭肿头败血症病毒XD株的鸭胚原代细胞培养特性及免疫电镜观察研究[学位论文]2007 引用本文格式：陈新宇.易静.张岚.朱平 包埋后免疫胶体金电镜样本制备技术探讨[会议论文] 2007