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生淀粉糖化酶产生菌Cellulosimicrobium spSDE的分离鉴定及酶学性质研究.pdf
第38卷第5期 工业微生物 Vd．38No．5
2008年lO月 Industrial Oct．2008
Microbiology
生淀粉糖化酶产生菌Cellulosimicrobium
sp．
SDE的分离鉴定及酶学性质研究
李风玲， 张璐， 刘连成， 沈标’
(南京农业大学生命科学学院，农业部农业环境微生物工程重点开放实验室，江苏南京210095)
摘要 从淀粉制品厂周围土壤中分离到一株高产生淀粉糖化酶的菌株SDE，经形态、生理生
化及16S
rDNA序列分析将其鉴定为Cellulosimicrobiumsp．。SDE菌株的最适产酶条件为pH
7．0，培养温度为30℃。培养42h粗酶液的酶活达175．3U／mr．。该酶以生玉米淀粉为底物时，最适
很高，80℃保温1
强的激活作用。
关键词：Cellulosimicrobium生淀粉糖化酶； 酶学性质
sp．；
生淀粉酶是指对不经过蒸煮糊化的生淀粉颗粒具 7H20
有水解活性的酶类。上世纪70年代由于两次石油危 121℃灭菌30min。其中玉米淀粉用甲醛蒸气灭菌
机，各国学者从节能和有效利用天然资源出发，开始重 24h后再在105C下干热灭菌2h，然后无菌操作加人。
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视对生淀粉酶的研究。其中生淀粉糖化酶(raw 1．2．2液体发酵培养基(％)
趣霉stiI】ggttmamytase，磷姒)能够将生淀粉直接水解为蛋白胨1．0，酵母粉0．5，NaCI1．0，玉米淀粉
葡萄糖，可以将传统工艺中的淀粉糊化、液化、糖化合 1．0。其中玉米淀粉用甲醛蒸气灭菌24h后再在
并为一步直接进行糖化，具有良好的节能前景。生淀 105℃下干热灭菌2h，然后无菌操作加入。
粉糖化酶已被用于生淀粉质原料的无蒸煮酒精发酵， 1．2．3培养条件
可节约总能耗的30％～40％【l】。正是由于生淀粉糖化 培养温度均为30℃，摇床转速为180r／rain。
酶具有的经济价值和某些特殊用途，因此一直受到国 1．3菌株的分离筛选
内外许多研究人员的关注旺]。但报道的大多的是由曲 将样品富集培养或直接制成菌悬液，梯度稀释
霉(As／℃rg／／／us)t31、根霉(Rh／zopus)H]、噬纤维菌属适当倍数后涂布于以玉米淀粉为唯一碳源的分离平
(o蛔吼蟹z)凸’61和芽孢杆菌(t王willus)[7’81等产生的，而板中，30℃恒温培养3d，滴加碘液，测定菌落周围的
其他类群的微生物很少。本文介绍了一株降解生淀粉 透明圈和菌落直径的比值作为初筛指标，以液体发
能力较强的Cellulosimicrobium菌株。 酵培养后的生淀粉糖化酶活力为复筛指标。
1．4菌种鉴定
1材料和方法
对分离纯化得到的菌株进行菌体形态观察、生
1．1样品来源 rDNA序列
理生化试验(方法参见文献u刨)及16S
取自南京下关区淀粉制品厂周围的土壤。 同源性比对分析等，确定其分类地位。菌株的16S
1．2培养基及培养条件
1．2．1分离培养基‘91(％)
玉米淀粉2，NILNQ0．2，K2HP040．2，峨· DH5a，通过蓝白斑筛选阳
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