基于核酸分子杂交免疫芯片抗体固定新方法.pdfVIP

第4 1 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE )摇 研究报告 第2 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2013 年2 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 199 ~204 DOI:10.3724/ SP.J.1096.2013.20667 基于核酸分子杂交的免疫芯片抗体固定新方法 1 1 2 3 1 * 1 沙 莎摇 殷 赟摇 高晓莲 摇 黄庄荣摇 余 挺 摇 郑晓冬 1 (浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310058 ) 2 3 (美国休斯顿大学化学系,德克萨斯州77004 )摇 摇 (浙江大学农业与生物技术学院,杭州310058 ) 摘摇 要摇 基于核酸分子杂交原理构建了一种新型抗体固定方法。 先将抗体与寡核苷酸单链交联,再将两者的 复合物与固相载体表面上的互补寡核苷酸链结合,从而将抗体固定到载体的表面。 在磁珠表面对该固定方法进 行实验,证明了方法的可行性。 以本方法构建了针对转基因Bt Cry1Ac 蛋白的免疫芯片,用Cy3 标记二抗对其 探针固定效果进行分析,并且在芯片上对Bt Cry1Ac 蛋白进行梯度浓度检测试验。 结果表明,以本方法构建的 抗体芯片,探针分布具有良好的特异性;探针层分布均匀,非特异吸附小;检测灵敏度达到0.01 ~0.05 mg/L ;此 外,通过杂交核酸双链的解离成功实现了芯片的再生,有助于解决传统抗体固定方法中芯片不可再生的问题。 关键词摇 免疫芯片;抗体固定;抗体鄄寡核苷酸复合物;核酸杂交 1摇 引摇 言 免疫芯片是实际应用中最重要、研究最多的一种蛋白质芯片。 其原理是将几个、几十个、甚至几万 个或更多数量的抗体(或抗原)高密度排列在固相载体上形成探针层,通过探针与靶物质的结合辅以合 [1] 适的检测技术来获得样品中的多项指标信息 。 与传统的免疫分析方法如酶联免疫吸附法(ELISA )相 比,免疫芯片最大的优点是能够实现并行、快速、高通量的检测;同时免疫芯片极大地节省了时间、试剂, [2 ~5] 被广泛应用于蛋白质组学研究以及疾病诊断、药物筛选、食品安全和环境安全监测等领域 。 [6,7] 抗体探针的固定是免疫芯片构建过程中的关键步骤 。 大量研究表明,不同的探针固定方法对免 [6 ~9] 疫芯片的灵敏度和准确性等特征有明显的影响 。 由理想的抗体固定技术构建的免疫芯片应具备以 下特点:特异性良好;能够保持所固定抗体与抗原结合的能力;探针层均匀,同一芯片上各样品位点整齐 [10] 均一;非特异吸附小,信噪比高等 。 由于抗体空间结构复杂,目前对抗体还无法实现类似核酸芯片的 体外链式扩增,不能直接在载体上制备活性抗体。 一般情况下,免疫芯片的合成基于预先制备好抗体探 [4,5] 针,再通过一定的物