酵母双杂交系统第研究进展.pdfVIP

维普资讯 2005年 S月 安庆师范学院学报(一然秆学版) May．2005 第 ll卷第 2期 JournalofAnqingTeachersCollege (NaturalScience) VoI．11NO．2 酵母双杂交系统的研究进展 吴 娟h。，钱 凯。，杨泽峰。 (1．安庆师范学院 生命科学系， 安徽 安庆 246011；2．扬州大学 生物科学与技术学院， 江苏 扬州 225009； 3．扬州大学 农学院， 江苏 扬州 225009) 摘 要：酵母双杂交系统自创建以来，已成为研究蛋白质相互作用的重要手段，揭示了大量未 知蛋白质之间的相互作用。随着该系统的广泛应用，近年来又发展了三杂交系统、单杂交系统、逆向 双杂交系统、SOS富集系统等。酵母双杂交及其衍生系统已经成功地运用于蛋白质之间，蛋白质与 DNA、RNA、配体之间相互作用的研究。 关键词：酵母双杂交系统；蛋白质间相互作用；三杂交系统、AD；DNA--BD 中图分类号：Q81 文献标识码：B 文章编号：1007--4260(2005)02--0059--05 作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一，蛋白质组学正受到越来越多的关注。蛋白质组学的 研究目标是对机体或细胞的所有蛋 白质进行鉴定和结构功能分析。蛋白质间的相互作用及作用方式同 样也是蛋白质组学研究所面临的问题。研究蛋白质间的相互作用有多种方法，常用的如酵母双杂交系 统、亲和层析、免疫沉淀、蛋白质交联等。其中，酵母双杂交系统 (YeastTwo--hybridSystem)是当前发 展迅速、应用广泛的主要方法。该方法在不断完善，如今它不但可用来在体内检验蛋白质间的相互作 用，而且还能用来发现新的作用蛋白质，在对蛋白质组中特定的代谢途径中蛋白质相互作用关系网络 的认识上发挥了重要的作用。实验表明双杂交技术在蛋白质组学上的应用是成功的。本文将就双杂交 技术的产生、发展及其应用作一介绍。 1 酵母双杂交系统基本原理 真核转录因子的结构特点是酵母双杂交系统的理论基础。本世纪8o年代末期对真核转录因子的 研究为酵母双杂交系统的创立提供了理论基础 。研究证实，很多真核基因的表达通常处于较底水平，一 旦有转录激活蛋白的诱导则出现高水平表达。这种转录激活蛋白，如酵母的GAL4等都具有两个相互 独立的功能——与特异性DNA序列结合的功能和引导RNA聚合酶激活转录的功能。同时更重要的发 现是：这两个功能分别由两个独立的功能区域负责。即DNA结合功能区(DNA--bindingdomain，DNA — BD)和激活转录功能区(ActivationDomain，AD)。前者由位于N一末端的1—147个氨基酸构成，负 责结合上游顺式激活序列(UpstreamActivationSequence，UAS)，后者由位于C一端的768--881个氨 基酸构成，负责引导RNA聚合酶复合体激活基因转录。DNA—BD和AD对激活转录是必不可少的。 理论上，任何一个AD都可以与任何一个DNA—BD结合并激活转录，即杂合的DNA—BD和AD可以 组成一个具有功能的转录激活蛋白。不仅如此，只要DNA—BD和AD能够通过一定的方式在空间上 足够的靠近(如借助其他蛋白质的相互结合使其足够靠近)，即使它们间没有共价结合也可激活转录。 基于上述研究，科学家设想可以借助任何两个能相互作用的蛋白质为桥梁，将相互分开的DNA— BD和AD在空间上使它们彼此靠近，并重建一个具有功能的转录激活蛋白。这样，促使Fields和 Song · 收稿 日期：2005--02--15 ．． 作者简介：Ji~j(1980--)，女，安徽寿县人，扬州大学硬士研究生，主要从事植物功能基因组学研究。 维普资讯 ·60 · 安庆师范学院学报 (自然科学版) 2005正 于 1989年首先创立了酵母双杂交系统。 Fiel