荧光漂白后恢复技术与其在活细胞分子机制研究中的应用.pdfVIP

生 物 技 术 通 讯 LETTERSINBIOTECHNOLOGY Vol.19No.4Jul.,2008 635 文章编号：1009-0002(2008)04-0635-03 综 述 荧光漂白后恢复技术及其在活细胞分子机制研究中的应用 张志毅,周涛,巩伟丽,张德添 国家生物医学分析中心,北京 100850 [摘要] 荧光漂白后恢复( )是一项利用荧光探针研究活体细胞中各类分子迁移特性的技术。简要介绍了 技术 FRAP FRAP 的原理和具体实施要求,列出了动态比和扩散系数的计算公式,并例举了近几年FRAP技术在细胞分子机制研究中的应用。 [关键词] 荧光漂白后恢复;荧光漂白损失;动态比;扩散系数 [中图分类号] Q25Q2-33 [文献标识码] A 2 FluorescenceRecoveryAfterPhotobleachinganditsApplicationsintheStudyof CellularMolecularMechanics ZHANGZhi-yi,ZHOUTao,GONGWei-li,ZHANGDe-tian NationalCenterofBiomedicalAnalysis,Beijing100850,China [ ] AbstractFluorescencerecoveryafterphotobleaching(FRAP)isatechnologyforstudyingthemobilityofmoleculestagged withfluorophoresinlivingcells.Inthispaper,theprincipleandoperatingrequestofFRAPwereintroduced,theformulas ofmobilefractionanddiffusioncoefficienpresentedt, andfinallysomecasesoftheFRAPapplicationsinthestudyof cellularmolecularmechanicsinrecentyearsweregived. [ ] 2 2 2 Keywords fluorescencerecoveryafterphotobleachingfluorescencelossinphotobleachingmobilefractiondiffusionco- efficient 在生命科学研究进入分子水平的几十年里,应用多种手段 间段的荧光强度变化并绘制曲线,从恢复曲线就可以得到关于 已获得大量关于细胞内分子的定性知识 分子迁移速率、动态分子比例等信息[1] ,对各细胞器的分子组 。 成有了基本了解,找到许多在细胞生命周期中发挥重要作用的 1.2 FRAP技术的基本要求 蛋白质,确认了许多重要蛋白质之间相互作用的存在并初步描 1.2.1 选择合适的荧光探针 由于要应用于活细胞,无法采用 绘出一些信号通路。这些研究主要解答了 “是什么”的问题,而在 荧光抗体,荧光染料是观察各种离子和其他非蛋白分子的首选 生命过程中这些分子在活细胞中是 “怎么样”相互配合发挥作用 荧光标签。绿色荧光蛋白( )及其后一系列荧光蛋白的相继发