应用超高压液相-质谱联用技术同时测定花生与其制品中的六种黄曲霉毒素.pdfVIP

应用超高压液相-质谱联用技术同时测定花生及其制品中的 六种黄曲霉毒素 蔡增轩 1 潘红锋 2 王丽丽 2 韩 铮 3 任一平 1 1 浙江省疾病预防控制中心，2 浙江工业大学药学院，3 浙江大学药学院 【摘要】：目的：首次同时对花生及其制品中的六种黄曲霉毒素同时进行定性定量分析的超 高效液相色谱三重四极杆质谱确证方法。方法：样品用84/16的乙腈/水混合液匀浆提取3分 钟，经一种创新型的自制混合固相萃取柱纯化后,进样，经Acquity UPLC HSS T3 柱 （100mm×2.1mm, 1.7μm particle size;Waters, Milford, MA, USA ）分离，在6分钟内6种黄曲霉 毒素即可得到完全分离。结果：标准曲线的线性范围分别是：AFT B1:0.08-10 ug/kg ,AFT B2:0.4-20 ug/kg,AFT G1: 1-20 ug/kg,AFT G2: 0.4-20 ug/kg,AFT M1:0.4-20 ug/kg,AFT M2:1 -20 ug/kg。加样平均回收率为：75.0%-86.9%.RSD为1.8-9.4%,然后运用所建立的方法 对20份不同产地不同批次的花生及其制品进行分析。结论：所建立的超高压液相质谱联用的 方法能够显著的提高样品通量，减少溶剂的损耗，定量限LOQ能够满足欧盟相关的黄曲霉 素的最低限量标准，首次在花生及其制品中发现黄曲霉毒素M1 ，M2 的存在。此方法是一种 快速、灵敏、准确、可靠的检测方法。 关键词：超高压液相-质谱联用 黄曲霉毒素 多反应离子监测 在各种真菌毒素中，黄曲霉毒素是最为常见的一类毒素，主要分为B1 、B2 、G1、G2、 M1 、M2 。在晒干、储存、加工原料花生的过程中，都会引入黄曲霉毒素[1] 。毒理学研究表 明，黄曲霉毒素能够造成动物精神癫痫而导致死亡[2]，甚至有证据表明，由黄曲霉毒素污染 的空气中的灰尘颗粒也有可能导致肺癌的产生[3] 。 鉴于各种黄曲霉毒素的易引入和比较强 烈的毒性，欧盟等相应的机构已经对黄曲霉毒素的含量水平做了严格的规定：在干果中B1 不得超过2 ug/kg,黄曲霉毒素的总量不得超过4 ug/kg (B1+B2+G1+G2) 。因此，研究一种新 的高灵敏度、高选择性的同时测定黄曲霉毒素的检测方法，对于食品的安全性检测和食品的 质量控制具有十分重要的意义。 [4] 现在应用比较广泛的黄曲霉毒素的检测方法主要有：薄层色谱法（TLC ） 、高效液相 [5] [6] [7] 色谱法（HPLC ） 、二维薄层色谱法 、酶联免疫吸附测定法（ELISA ） 等。薄层色谱法 操作繁琐、污染大、定量差、耗时长；而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高，但特异性差。 普通的HPLC结合荧光检测的方法，黄曲霉毒素需要经过衍生化以后才能进行测定，操作烦 琐，分析时间长，消耗的溶剂量比较大。普通的HPLC-MS/MS分离的效果差，分析花费的 时间长，因此，该方法仍然具有比较大的提升空间。近年来，由于超高压液相色谱技术的引 进，色谱分析得到了比较大的提高。随着分析效率、分析时间、灵敏度在食品质量控制、毒 性分析等方面越来越重要，UPLC-MS/MS必然扮演着越来越重要的角色。 本文通过新型的自制混合柱对样品提取液净化后，采用超高压液相色谱质谱联用技术对 20种花生及其制品进行6种黄曲霉毒素的同时分析， 6分钟内6种黄曲霉毒素即可得到分离， 定量限为0.004-0.272ppb,完全满足了欧盟及其它各国对花生及其制品中各种黄曲霉毒素的 限量要求，并且在检测过程中首次在被污染的花生及其制品中发现了M1 ，M2 的存在。结果 表明，所建立的超高压超高压液相-质谱联用的方法为同时检测花生及其制品中的六种黄曲 霉毒素提供了一种快速、灵敏、准确、可靠的检测方法。 [基金项目]“浙江省分析测试”科技计划（编号2008F81G1360019） 1 材料与方法 1.1 化学试剂(材料与试剂) 黄曲霉毒素 Afla