小鼠胚胎干细胞分化细胞永生化后致瘤性的研究.pdfVIP

主堡墼垄处型盘查垫!!堡!旦箜!!鲞签!塑 33 !!!!!!!!壁!!坚：!竺：!!!!!!!!：!!!盟!：! 实验论著· 小鼠胚胎干细胞分化细胞永生化后 致瘤性研究 沈干丛笑倩 【摘要】 stem 目的研究小鼠胚胎干细胞(embryoniccells，ESC)诱导分化的血管内皮细胞永 生化后的致瘤现象。方法体外培养系中，将诱导的小鼠ESC的拟胚体分化为圆形细胞。通过脂 telomerasereverse 质体将人端粒酶催化亚基(human transeriptase，hTERT)基因转染诱导分化中的圆 形细胞，应用RT-PCR及免疫组织化学等方法分析、观察诱导分化的血管样结构的组成细胞和被 hTERT基因转染的圆形细胞的形态和生物学特性。并将基因转染的细胞植入裸鼠皮下，观察其致 瘤性。结果携带hTERT基因、从ESC分化而来的圆形细胞TEC3，在体外可大量增殖，培养的前 2d(48h)，细胞数就增加了1倍多，至72h细胞数增加了12倍，持续传代，端粒酶活性高表达，95％ 细胞表达Flk一1、CD34和vwF，并有管道化生长特性。将细胞植入裸鼠皮下后1周有肿瘤形成。结 论转染hTERT基因可使小鼠ESC分化细胞持续增殖，植入裸鼠体内具有致瘤性。 【关键词】 胚胎干细胞； 内皮细胞； 人端粒酶催化亚基基因； 致癌性试验 The ofimmortalizedcellsdifferentiatedfrommouse stemcellsSHEN tumorigenicity embryonic PlasticandReconstructive Gan+，CONGXiao—qian．+Departmentof Surgery，2ndAffiliatedHospital， Medical 21 Na删ng University，Nanjing0003，China Todiscussthe ofimmortalizedendothelialcells 【Abstract】0bjectivetumorigenicity differentiatedfrom stemcells．MethodsThe invitrofrom embryonic embryoidbodies(EB)formed stem inducedtodifferentiateinto cells，were cells”(the ofendothelial embryonic many“round precursor ceils”later tube—like cells)．These“roundformedthevascular structures．Toimmortalizethesecells． humantelomerasereverse was transfeetedinto“round transcriptase(hTERT)cDNAcells”bylipofectine， RT—PCRand wereusedtoevaluatetheimmortalizedcells．Andthe of immunocytochemistry tumorigenicity thesecellswereevaluated i