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番木瓜单染色体的显微分离与克隆.pdf
热带亚热带植物学报 2005,13(4):310—314
JournalofTropicalandSubtropcialBotany
番木瓜单染色体的显微分离与克隆
陈晓静,申艳红,卢秉国
(福建农林大学园艺学院,福州 350002)
摘要:用玻璃针显微分离出番木瓜 (CaricapapayaL.)单染色体,经过 LA-PCR扩增得到80-700bp的DNA片段。
Southern杂交表明,扩增片段与番木瓜基因组DNA之间有间源性,从而证明番木瓜单染色体DNA已经被成功扩增。
将扩增产物克隆到pGEM.T.Easy载体中,约获得 1.】8x10个克隆,酶切鉴定插入片段大小为 100—400bp。
关键词:番木瓜;微分离;微克隆;单染色体DNA文库
中图分类号:Q813.4 文献标识码 :A 文章编号:1005—3395(2005)04—0310—05
M icrodissectionandM icrocloningofSingleChromosomeofPapaya
CHENXiao—jing,SHENYan—hong,LUBing—guo
(CollegeofHorticulture, Ⅱ,lAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002,China)
Abstract:Singlechromosomeofpapaya(CaricapapayaL.)wasisolatedbyglassneedles,andthechromosomal
DNAwasamplifiedbyLA—PCR (LinkerAdapterPCI.ThePCRproductswereasmearrangedfrom8Oto700bp.
Southern blotshowedthatthePCRproductswerehomogeneouswith thepapayagenomicDNA,indicatingthat
DNAsrfom the single chromosomehad been successfully amplified.ThePCR productswere cloned into
pGEM—T—Easyvectorandabout1.18~10 recombinantcloneswereobtained.Thesizeoftheinsertedrfagmentsof
clonesrangedrfom 100to400bp.
Keywords:Caricapapaya;Microdissection:Microcloning;SinglechromosomeDNA library
染色体微分离、微切割与微克隆技术是细胞遗 在本实验室建立起来的染色体分离系统基础上 ,
传学和分子遗传学结合的桥梁,通过与荧光原位杂 探讨番木瓜单染色体微分离及体外克隆技术,为具
交 (Florescenceinsituhybridization,FISH)、DNA 有小型染色体植物的染色体微分离与微克隆奠定
测序、文库筛选、比较基因组杂交等分子生物学技 基础 。
术相结合,已经在人类和动物进化、基因组结构的
研究、基因分离与定位及物理图谱构建等方面有广 1材料和方法
泛的应用,并取得 了令人瞩 目的成绩。由于植物细
1.1实验材料
胞有细胞壁而且细胞分裂同步化困难,因此该技术
供试番木瓜 (Co2-icappaayaL.)种子 (红妃 品
在植物上的应用起步较晚。直到 1991年,Sandery
种)取 自福建省漳州市农业科学研究所。
等 。【1将黑麦 (Secalecereale)B染色体片段克隆到了
入载体DNA上,仅获得了一个重组克隆。近几年,已相继 1.2染色体标本制备
进行了水稻 (
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