参杖颗粒对大鼠实验性肝损伤Bax、Bcl-2+的表达影响%7f.pdfVIP

参杖颗粒对大鼠实验性肝损伤Bax、Bcl-2表达的影响 高清华1 段妍君1 吕文亮2，1 田梦源2马维平2王菲2  1．湖北中医药大学430061 ⒉吕文亮,通信作者，湖北中医药高等专科学校434020 摘要目的：观察参杖颗粒对免疫性肝损伤大鼠的率、血清IL-10、IL-12水平和肝组织病 理改变的影响，探讨参杖颗粒对免疫性肝损伤大鼠的肝组织的保护作用，研究参杖颗粒防治 慢性肝病的药理学机制，为其临床应用提供实验依据。 关键词：慢性肝病/机制；实验性肝损伤；参杖颗粒 正文 1.实验材料 1.1动物清洁级Wistar雄性大鼠,体重200g±20g,由华中科技大学同济医学院实验动物学 部提供。 1.2药物： 处方：复方参杖颗粒是由丹参、虎杖、黄芪、鳖甲等中药组成的复方中药制剂，以上药物由 湖北省中医院附属凤凰门诊部药房提供。煎剂相当于2.0g/ml。药物制备方法：先将参杖颗 粒用适量的水浸泡30min后，煎煮三次，每次煮沸后均用文火煎煮一小时，然后过滤，分 别配置浓度为200%的药液，以上药液均在超声震荡器中震荡30min后在3000r/min离心 取上清液备用，放在4℃保存。按70kg成人计算，每日服用合剂量100ml，用实验动物与 人的体表面积比来进行等效剂量换算，大鼠中剂量为200%药液2ml。（相当于生药4g） 1.3试剂 1．2．1环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司提供，批号为010458。 1.3试剂 1.3.1冻干卡介苗制剂（DCG）由上海生物制品研究所提供。 1.3.2脂多糖（LPS）由美国Sigma公司提供。 1.3.3Bax、Bcl-2免疫组化试剂盒由武汉博士德公司提供。 1.4仪器 HH-W21-600电热恒温水温箱、LD5-2A低速离心机、18MC型酶标仪等。 2.实验方法 2.1动物分组 分组前，对所购大鼠用普通饲料喂养一周后，将50只大鼠标记后按随机分为5组，每 组雌雄各半。第一组为正常组；第二组为实验性肝损伤大鼠组，即模型组；第二组为参杖颗 粒小剂量组；第四组为参杖颗粒中剂量组；第五组为西药对照组，即环磷酰胺组。 2.2饲养环境 50只大鼠分笼喂养于10个等大小鼠笼中，每笼5只，笼大60×40×40cm3，安静，干 燥，通风，室温平均25℃保持室内和笼内卫生，充足饮水喂食。 2.3造模方法 采用卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）建立实验性肝损伤大鼠模型。注射LPS2小时后， 取模型组大鼠，脱颈处死取其肝脏标本，观察病理切片。肝组织出现典型的灶性坏死和大量 炎细胞浸润，示造模成功。 2.4给药处理 实验第一天除正常组外，余组大鼠均腹腔注射BCG8mg（约5×100个活菌）。从第一 天起，中药中、小剂量组及西药组开始给药，中药剂量按人与动物体表面积换算，计算出小 剂量组为 1ml/kg，中剂量组为 2ml/kg，灌胃，每天一次，西药对照组环磷酰胺用量为 12.4mg/kg，腹腔注射，隔日一次。正常组、模型组灌服生理盐水5ml/kg，每天一次。第 12天上午8时30分给药，下午3时30分（除正常组外）所有大鼠腹腔注射LPS（30ug/kg 体重）。下午5时30分开始摘眼球取血，后脱颈椎处死，取肝右叶以4%多聚甲醛固定，分 离血清，于-20℃冰箱中冻存待检。 2.5观察项目与方法 2.5.1一般情况：观察大鼠体重、精神、运动、饮食、皮毛色泽等情况。 2.5.2肝组织病理学检查：动物外死后，迅速摘取肝脏，用冷生理盐水洗涤肝脏右叶，用 4%多聚甲醛固定大鼠肝脏，制成切片，HE染色，光学显微镜下观察肝脏损伤情况。 2.5.3肝组织Bax、Bcl-2阳性百分率检测：用免疫组化法，严格按照试剂说明 书操作。 2.6数据统计与处理方法 计量资料以X±S表示，组间比较用方差齐性分析及t检验。 二.实验结果 1一般情况 正常组大鼠活泼喜动，眼睛鲜红,有精神，进食好，毛光亮。模型组及西药对照组大鼠 随着实验进行开始变得不喜欢运动，表现为萎靡状，弓背喜卧，进食欠佳，毛稀疏干、粗乱 蓬松，特别以西药对照组为甚，模型组、西药组各死亡二只大鼠。中药中、小剂量组未见明 显变化。 2各组大鼠肝脏形态及病理学观察 2.1肉眼观察 模型组大鼠肝脏形态体积明显增大，包膜紧张，色较苍白，混浊而无光泽；各治疗组肝 脏形态学上变化不大，色泽基本正常；正常组大鼠肝脏呈暗红色，未见异常改变。 2.2肝脏病理形态学改变 正常组：省略。