醋酸铅诱导晋南牛成纤维细胞凋亡作用及研究.pdfVIP

醋酸铅诱导晋南牛成纤维细胞凋亡作用的研究 王会1’2，刘娣2，关伟军H，马月辉H (1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；2．东北林业大学，哈尔滨150040) 引言 细胞凋亡贯穿于机体的整个过程，完成新旧细胞的生死交替，它对机体的发 育、存活及维持正常生理功能都有着重要意义；另外，细胞凋亡还参与某些疾病 的发生、清除损伤、转化细胞、防止癌变等过程。因此，研究凋亡因素诱发动物 细胞凋亡及其机理具有重要的理论和实践意义。本研究以中国地方品种晋南牛成 纤维细胞作为研究对象，采用细胞生物学、生物化学等方法从细胞、亚细胞和分 子水平较系统的探讨醋酸铅对晋南牛成纤维细胞的凋亡作用及其机理，填补了该 领域内的一项空白，对细胞生物学、免疫学和生物医学等领域的研究具有一定的 借鉴意义。 材料方法 实验所需晋南牛成纤维细胞来自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。采用 察，细胞毒性分析，流式细胞术，非损伤微测技术等多种方法研究了醋酸铅对细 胞凋亡的作用，为细胞凋亡机理研究获取了大量宝贵的基础数据。 结果 (1)醋酸铅诱导凋亡后相差显微镜下细胞群体开始衰退，细胞萎缩并空泡化， 出现凋亡小体等凋亡特征。AO／EB染色表明早期凋亡细胞呈淡黄色，晚期凋亡细 胞呈橘红色，相对染色更浓一些，有些晚期凋亡的细胞从某种程度上来说已接近 死亡。电子显微镜观察显示凋亡细胞细胞核变小，皱缩，微绒毛结构减少甚至消 失，胞浆空泡形成，染色质凝集，异染色质增多，核仁减少、浓缩甚至消失。 (2)细胞毒性分析表明醋酸铅诱导12h，24h，36h，48h后细胞增殖受到抑制，活 细胞数量下降，抑制程度随处理时间、醋酸铅浓度增加而增强，呈量效和时效关 系。 h后细胞凋亡率呈 (3)AnnexinV-FITC／PI双染显示醋酸铅诱导12h，24h，36h，48 现明显的浓度时间依赖性。 (4)细胞周期分析结果表明亚．G1峰随醋酸铅浓度增加而增加，并且引起G1期 阻滞，细胞的DNA合成受到抑制。 (5)处理组细胞在凋亡过程中线粒体损伤，细胞线粒体膜电位降低，功能受 损。 (6)处理组细胞在凋亡过程中线粒体，内质网钙库中的结合钙变成细胞质内的 游离钙离子，细胞内钙离子平衡被打破。 (7)非损伤微测技术显示细胞内外钙离子流速由醋酸铅处理前的内流变为醋酸 铅处理后的外流；细胞内外钾离子流速均为外流，但在细胞凋亡过程中流速增 大。 讨论 亡作用，表现出典型的凋亡特征，其机理可能是通过抑错JJDNA合成从而阻止细胞 增殖，降低线粒体膜电位损害其功能，改变钙稳态破坏信号分子等诱导凋亡的。 关键词：牛；成纤维细胞；氯化铬：凋亡 201 源平台项目(2012)资助。 +通讯作者：关伟军，男，19664；F-eF_，教授，博导，E-mail：weijunguan30l@gmail．tom； 马月辉，男，1964年生，研究员，博导，E．mail：yuehui～ma@hotmail．com。