对三个不同品种羊Ⅰ型内根鞘角蛋白基因差异的表达及研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会信息技术分会2012年学术研讨会 对三个不同品种羊I型内根鞘角蛋白基因 差异表达的研究 柳楠1，余娟娟1，赵金山2刘开东2曲绪仙3刘积凤1 站，山东济南250022) 摘要：本文探讨了敖汉细毛羊、小尾寒羊和莱芜黑山羊三个不同品种毛囊生长期与毛囊发育有关的特异基因表达模式。 方法；采用基因表达谱芯片技术对上述三个品种羊毛生长期颈部、腹股沟部的I型内根鞘角蛋白基因表达进行检测，通 表达量无品种间显著变化(差异倍数小于2)；而在腹股沟部的表达量在品种间差异极显著(差异倍数大于2，P0．01)。 实时定量PCR所得结果与基因芯片结果基本吻合。结论：I型内根鞘角蛋白基因家族在不同品种羊中的表达量与特异部 位毛囊分布密度有着重要的关系。 关键词：I型内根鞘角蛋白；内根鞘；毛囊；差异表达 毛囊是羊毛生长的基础部位。研究毛囊基因的调控机理对于提高羊毛产量具有重要的意义。从羊的 胚胎期开始直至出生后整个生命过程中，毛囊的发生发育始终呈现周期性变化，即生长期、休止期和退 行期。从毛囊的组织学结构可知，在毛囊内，内根鞘位于毛干和外根鞘之间【lt，是决定毛纤维形成的细 胞群。内根鞘是由Henle层，赫胥黎层和内根鞘角质层[2卅组成，决定毛干的形状【5】。 角蛋白是毛囊和皮肤生物学功能重要的决定因子之一，在一定程度上决定羊毛的品质和产量【6】。内 与毛囊的形态发生过程【7，9】。内根鞘角蛋白基因目前的研究主要集中在人的毛发基因免疫学和相关功能研 zJ研究证明I型内根鞘角蛋白基因在羊的内根 oIRSal，olRSa3．2，olRSa2和olRSa3．1。Rogers(2004)【l 但这4个基因在不同的羊品种间是否存在差异却很少有报道，因此本研究应用基因表达谱芯片技术对I 型内根鞘角蛋白基因(融砣5，KRT26，艘慰7和欣慰艿)在三个不同生产方向的羊品种问的表达差异 进行分析，为进一步研究内根鞘角蛋白基因在毛囊发育中的分子调控机理提供参考依据。 27 论文集 表1 I型内根鞘角蛋白基因的定位 基因名 在毛囊中的定位 髓质层，前髓质层和Henle层，赫胥黎层和内根鞘角质层 KRT25(10c443079) KRT26 内根鞘角质层 KRT27 髓质层，前髓质层和Henle层，赫胥黎层和内根鞘角质层 KRT28(10c443080)髓质层，前髓质层和Henle层，赫胥黎层和内根鞘角质层 1材料和方法 1．1皮肤样品采集 样品采自青岛奥特种羊场相同饲养条件下的敖汉细毛羊、小尾寒羊和莱芜黑山羊的成年羊各3只， 分别在其颈部(多毛区)和腹股沟部(少毛区)剪取约1cm2的皮肤组织，立即放入冻存管，液氮中保 存备用。 1．2RNA的提取和检测 度和纯度。 1．3基因芯片与分析方法 Gene 基因芯片来源于安捷伦绵羊表达谱微阵列芯片(AgilentSheep Expression 的滑动模式，结合了NCBI数据库提供的的绵羊的序列以及安捷伦科技公司的数据库共设计了15208个 eDNA探针。本实验芯片过程主要包括cDNA／aRNA样品合成和标记；标记效率质量检测；芯片杂交； 图像采集和数据分析。使用GenePix4000B芯片扫描仪将实验结果转换成数字型数据保存，使用配套软 GX对原始数据进行标准化处理分析。为了使绵羊和山羊间的表达谱数据具有可比性，我 件GeneSpring 们将所有芯片数据以MYODl基因为阴性对照进行了校正。差异分析采用T-检验。 1．4实时定量PCR验证 为了验证芯片结果的可靠性，实时定量PCR技术被使用去验证4个待测基因的表达量[13】，选择 3000Realtime MYODl作为管家基因