放射线抵抗宫颈癌细胞株DNA损伤修复基因表达谱分析.docVIP

放射线抵抗宫颈癌细胞株DNA损伤修复基因表达谱分析 [摘要 目的：对放射线抵抗宫颈癌细胞株DNA损伤修复基因表达谱进行分析。方法：对APE1在宫颈癌中的表达情况进行免疫组化分析，同时研究其和宫颈癌的临床病理因素之间的关系。结果：在APE1水平表达方面，宫颈癌组织、正常宫颈组织、CIN病例具有显著差异，差异具有统计学意义（p0.05）；APEl表达强度与FIG0分期、病理分级和淋巴结转移情况有关(P．05)，与年龄和病理分型无关。结论：通过APE1表达强度，一方面能有效显示宫颈癌是否出现侵袭好转移，另一方面显示APE1的DNA损失修复功能可能是导致宫颈癌放疗出现抵抗的重要因素之一。 关键词：放射线；抵抗；宫颈癌细胞株；DNA；损伤；基因表达 据相关研究发现，宫颈癌已经成为女性疾病的常见疾病，就发病率和死亡率方面，已据我国妇科肿瘤的第一位和第二位。对于中晚期和术后复发患者，临床通常进行放射治疗且效果显著，但在治疗同期发现，部位宫颈癌患者对放射治疗产生一定程度敏感和抵抗，因此，对放射线抵抗宫颈癌细胞株DNA损伤修复基因表达谱进行分析将显得非常重要对此主要探讨DNA损伤修复基因APE1与宫颈癌放放射抵抗的相关性，现将研究结果报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取我院2011年2月~2015年2月收治的100例需接受锏-252中子放射联合盆腔外照射治疗的宫颈癌患者的临床病理标本并将其作为观察组；50例CIN子宫颈上皮内肿瘤患者和50例正常宫颈组织并将其作为对照组。观察组：年龄在25~85岁，平均年龄45.5±2.5岁；有92例患者为鳞癌、8例患者为腺癌；48例癌症患者为中高分化程度，其余患者为低分化程度。对照组：CIN病理中年龄在24~83岁，平均年龄为38.4±2.8岁；正常宫颈组织中年龄在30~70岁，平均年龄为42.6±2.9岁。 1.2 仪器和试剂 仪器：LEICA AM 2135型切片机、电热恒水浴箱、温控微波炉、5840型台式冷冻离心机、5415型台式离心机、电子天平等；试剂：鼠抗人APE1单克隆抗体、H202、甲醛、DPX封片剂、PBS磷酸盐缓冲剂等。PBS磷酸盐缓冲剂配置方法：1：选择PBS磷酸盐缓冲试剂一袋；2 将其融入到三蒸水中，剂量控制在1000ml；3 将步骤二所得液体融入到1000ml试剂瓶当中；4 加入三蒸水并继续搅拌混匀；5 控制酸碱值为7.2 。 1.3 方法 免疫组化学染色 具体操作方法包括以下几点：（1）将4μm石蜡包埋组织进行连续切片，同时将切片置入60℃烤箱，时间为4h；（2）利用纯二甲苯进行2次脱蜡，每次脱蜡时间为5min~7min，同时行乙醇梯度水花（浓度按照100%、95%、80%、70%依次进行）；（3）PBS浸泡两次，每次5min，温度为25摄氏度，每次浸泡时需加入浓度为3%甲醇-H202进行封闭以消除内源性过氧化物酶；（4）PBS浸泡三次，每次5min，使用酸碱值为6的0.01M枸橼酸盐缓冲液浸泡，同时行微波炉炉内加热，中档6min、暂停2min、低档5min、冷却20min；（5）将浓度为5%的正常山羊血清进行室温封闭，时间10min；（6）倾去血清，按照l：2000对APEl一抗进行稀释，湿盒内4℃冰箱过夜。用PBS代替一抗作为阴性对照；（7）行常规梯度酒精脱水、二甲苯透明、DPX封片保存；（8）进行显微镜下观察。 1.4 统计学处理 在统计方法上使用SPSS11.0(Statistical Product and Service Solution)统计软件，数据用(x(s表示，P(0.05为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 APE1在正常宫颈组织、CIN病例、宫颈癌组织表达 在APE1水平表达方面，宫颈癌组织、正常宫颈组织、CIN病例具有显著差异，差异具有统计学意义（p0.05）。具有数据详见表1 组别 例数 APE1表达水平 正常宫颈组织 100 189491.3±27976.4 CIN 50 349942.0±65923.9 宫颈癌 50 549962.5±163638.6 注：正常宫颈上皮APE1呈细胞核表达、CIN上皮APE1呈细胞核表达、宫颈癌APE1呈胞核表达、胞浆表达或核浆共表达。 2.2 宫颈癌APE1表达水平和临床病理因素之间关系 宫颈癌APE1表达强度在年龄方面（以43为界）无关；与病理类型（鳞癌和腺癌）无关；与分化程度相关，低分化程度则APEl表达强度越高；与和FIG0分期相关，III+IV期表达强调较高；与淋巴结转移情况相关，当患者出现转移时，则表达强度越大。 2.3 APE1亚细胞定位及表达水平与生存时间的关系 在对患者进行随访过程中发现： APE1核表达组和浆表达组在生存时间方面具有显著差异，差异具有统