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小鼠microRNA367逆转录病毒
载体的构建与检测
张志人 王春生 王子竹朴善花 安铁洙*
东北林业大学生命科学学院，哈尔滨150040
摘要：为进一步研究microRNA在细胞重编程机制中的作用，构建小鼠microRNA367逆转录病毒载体。
根据NCBI上小鼠microRNA367的相关序列设计引物，在上游引入BamHI，下游引入XhoI，然后以成年
ICR小鼠基因组为模板，克隆小鼠miR367基因，片段长度为350bp。将目的基因片段克隆到pMx逆转录
病毒载体上并进行酶切鉴定和PCR鉴定，鉴定正确的阳性克隆送测序。用测序正确的miR367-pMx载体
转染plat-E细胞用来包装逆转录病毒颗粒，分别在转染后24h和48h收集病毒悬液侵染小鼠胚胎成纤
维细胞。侵染后第五天提取MEF细胞的总RNA，逆转录成cDNA，以此为模板进行Q-PCR检测。其结果，
侵染后的MEF细胞中miR367的相对表达量提高了170多倍。上述结果表明，成功构建小鼠microRNA367
逆转录病毒载体。
关键词：体细胞重编程；microRNA357;逆转录病毒载体
小鼠骨骼肌Desmin启动子的克隆
及表达活性分析
薛 超 王春生 张志人 朴善花 安铁洙
东北林业大学生命科学学院，哈尔滨150040
摘要：为了探明小鼠Desmin基因启动子在体细胞中的表达活性，本研究根据NCBI中小鼠Desmin
启动子的序列，利用生物软件PrimerPremier6.0设计序列上、下游引物，克隆小鼠基因组中Desmin
启动子片段，然后与pAcGFP1-N1载体中的CMV启动子进行置换以构建真核表达载体pAcGFP1-N1-
Des，然后将pAcGFP1-N1-Des依次转染CHO-K1、COS-7、293GP和NIH-3T3等细胞后，观察绿色
荧光蛋白表达活性。
关键词：小鼠；Desmin基因；启动子；活性分析
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