第五讲胚胎工程.pptVIP

PPL公司克隆猪 克隆高产奶牛 克隆鼠  研究: 亚系建立、 诱导分化条件、化学诱变、转基因动物、克隆动物、分化过程中重要标志的发现、干细胞map建立 应用: 细胞治疗与组织工程种子细胞 治疗性克隆 胚胎干细胞以其多能性及无限制增殖为应用优势,而受其肿瘤性及伦理问题所限制 成体干细胞以其安全性为应用优势,而受其分离纯化扩增困难所限制 两者的共同困难包括: 如何诱导? 诱导到什么程度? 移入体内的干细胞是原地不动还是移行它处? 干细胞在体内的生长如何控制? 异体移植干细胞如何配型? 同体的干细胞经体外操作再移入体内其安全性如何?  实验动物质量控制 ①遗传控制——按遗传纯和程度的分类及其定义。 基因型是否相同分类 ②微生物控制分类定义及其相应的环境设施 实验动物环境控制 隔离系统\屏障系统的定义 空气洁净度的定义 生物安全实验室的定义及分类 空气中粒子的分类 洁净室的概念及分类 实验动物胚胎工程 胚胎工程定义 胚胎工程内容 干细胞、嵌合体技术、胚胎移植定义及在生物医学研究中的意义 谢谢大家 实验动物的胚胎工程 胚胎工程(embryo biotechnology)是利用人工方法影响、改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。 基本内容 超数排卵、胚胎培养、胚胎保存、胚胎移植、胚胎分割、性别鉴定、胚胎嵌合、细胞核移植、体外受精、基因导入以及胚胎干细胞 超数排卵 超数排卵是一种不正常的排卵，经外源激素处理的雌性动物，改变其性周期，使之按照预定时间超常量的排卵。 1只KM小鼠取得胚胎83枚，有1只兔取得胚胎88枚，有1只金黄地鼠采得72枚胚胎 超数排卵的生理基础 促卵泡激素(FSH) FSH为糖蛋白激素，由α、β两个亚单位结合，β亚单位是决定生物活性的 其生物功能是刺激卵巢中卵泡成熟并分泌雌激素。 促黄体激素(LH) 也称促间质细胞激素(ICSH)，为糖蛋白质激素. LH的α和β两个亚单位相互结合在一起时，才具有强的生物活性。LH所特有的生物作用是由β亚单位决定的 它的生物功能是激发排卵，促使黄体从萎缩破裂的卵泡中形成并分泌雌激素和孕激素。 孕马血清促性腺激素(PMSG) 这是一种比较特殊的促性腺激素，是一种糖蛋白结构PMSG分子，包含α和β亚单位，β亚单位是体现生物活性的功能团。在活体中，PMSG的半存留期，比垂体和其他胎盘促性腺激素要长。PMSG的β亚单位只能和PMSG的α亚单位结合；但是，PMSG的α亚单位可以和FSH的β亚单位、LH的β亚单位及HCG的β亚单位结合，而且使这几种β亚单位都具有生物活性。 人绒毛膜促性腺激素(HCG) 是人胎盘分泌的一种糖蛋白激素。HCG分子包含α和β亚单位。受精卵着床的第1天，孕体的滋养层细胞开始分泌HCG，孕后10d左右在尿中和血中都可以查出来。有人把HCG叫做全身激素，胎儿的HCG遗传密码能产生大量HCG，而成年人各组织和多种癌细胞也能产生HCG。但是只有胎盘的HCG是经滋养糖基化的糖蛋白质激素，这样的HCG才具有生物活性。HCG分子中的α和β亚单位一定是结合的形式，β亚单位才能够体现出生物活性，生物活性的强弱是β亚单位上的唾液酸含量决定的。HCG的生理作用是多方面的，这里主要是它促卵泡发育并排卵的作用，增大超数排卵的效果。 超数排卵的影响因素 动物遗传特性、 体况、 营养状态、 年龄、 发情周期的阶段、 卵巢的功能状态、 季节、 温度 激素的品种与用量 胚胎培养 二十世纪30年代Nicholas和Rudnik就开始对啮齿动物胚胎进行体外培养并获得成功。 啮齿类动物着床后胚胎培养(WEC)不仅被胚胎学家运用于胚胎正常发育的研究，而且其在环境致畸物的筛检及致畸机理研究中的应用亦愈来愈受到人们的重视。 胚胎保存 超低温长期冻存胚胎具有较强的实际意义。它能够使优秀品种品系(包括珍稀和濒危动物)的种质得到长期保存下来，逐步地将生物界的所有生命基因都长期保存起来，防止基因丢失，并且可以随时复苏、繁殖品系动物，在遗传理论指导下，可改良品种和培育新品种及品系，推动生命科学蓬勃发展。胚胎的低温保存不但安全可靠，而且可以减少大量的空间和财力上的支出，因此它是目前实现实验动物资源保存的最为有效的方法。世界上一些发达国家以此方法建立起了各自的包括实验动物在内的胚胎库，目前我国国家啮齿类实验动物种子中心和上海分中心等单位正在开展胚胎和配合子低温保存的研究。 胚胎保存的方法 缓慢降温法 玻璃化低温保存法。 两种方法的比较 两种方法最大的不同点在于缓慢冷冻方法可靠安全，但需要特殊的仪器设备(程序降温仪等)，该方法适用于大型实验动物单位和保种单位；而玻璃化低温保存则对设备要求相当低，利于普及，适用于保存一些特殊品系且数量较少的单位。 胚胎嵌合 将动