食品专业基础实验指导书-生物化学实验.docVIP

《食品质量与安全》 专业基础实验指导书 上海理工大学医疗器械与食品学院 实验实训中心 目录 课程名称：《生物化学实验指导》 实验名称：实验一 蛋白质含量的测定考马斯亮蓝G250染色法 实验三 紫外吸收法测定核酸的含量 实验一 蛋白质含量的测定考马斯亮蓝G250染色法 通过实验掌握蛋白质的定量测定方法。 预习要求： 要求预习实验讲义。 实验原理： 考马斯亮蓝G250测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。 考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。 蛋白质和考马斯亮蓝G-250结合，在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时内保持稳定。蛋白质-染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量。 实验设备与器材： 仪器 721型分光光度计、分析天平（万分之一）、量筒（100ml）、烧杯(250ml)、移液管(1ml, 5ml)、漏斗、漏斗架、容量瓶(100mL