考马斯亮蓝G-250.docVIP

　　本次蛋白质含量对比评测中，我们运用可溶性蛋白质含量测定的方法：《考马斯亮蓝G-250法(刘延林等，1998)》来进行两种样品的对比　　标准曲线的制作： 　　以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白质。称50mg考马斯亮蓝G-250溶于25mL 95%乙醇和50 mL 85%(w/v)的磷酸混合液中，用蒸馏水定容至500mL，快速滤纸过滤后储存于棕色瓶中备用。 　　称取100mg BSA，溶于蒸馏水中，定容至100mL，则其浓度为1000μg/mL。按表在6支具塞试管中分别加入BSA溶液和蒸馏水，配制成0～100μg/ml牛血清蛋白溶液各1ml，混匀后加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液，盖塞、混匀，室温静置2min，用分光光度计在595nm处检测吸光度。以测得的吸光值为纵坐标，表中各管蛋白浓度为横坐标，做标准曲线。 蛋白质标准曲线溶液配制表 　　吸取待测样品1～5ml，放入具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝G-250蛋白试剂，充分混合，放置2分钟后用10mm光径比色杯在595nm下比色，记录其消光值，并通过标准曲线得到每毫升溶液中的蛋白质含量。 ? 　　样品蛋白质含量(mg/L)=标准曲线上求得的蛋白质含量(g)/测定取样体积(ml) 　　实验结果： 　　1 ，标准曲线与回归方程 ? 　　2 ，样品测定(稀释250倍) 　　计算后得出灭菌奶的蛋白值含量比值是：伊利金典/蒙牛特