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第 7 卷第 2 期 过 程 工 程 学 报 Vol.7 No.2 2007 年 4 月 The Chinese Journal of Process Engineering Apr. 2007 CTAB法制备超螺旋质粒DNA 1,2 2 2 徐英黔 , 吴 蕾 , 甘一如 (1. 辽宁科技大学化工学院，辽宁 鞍山 114051 ； 2. 天津大学化工学院，天津 300072) 摘 要：研究了基因治疗用载体质粒 DNA 的一种非色谱的大规模纯化方法—CTAB 沉淀法，并对其进行了工艺优化. 首先采用高纯过滤介质 CelPure 去除大量杂质，并利用 CTAB 浓度梯度溶液研究了不同形式 DNA(超螺旋质粒 DNA 、 切口质粒 DNA 、线性质粒 DNA 、染色体 DNA)沉淀能力的差异，选择性地从蛋白质、RNA 及其他形式 DNA 中提取 超螺旋质粒 DNA. 针对含有 pcDNA3 的DH5α菌株，确定 CTAB 完全沉淀超螺旋质粒 DNA 的浓度为2.0 g/L ，由NaCl 对不同沉淀的溶解能力，确定溶解沉淀的最优盐浓度为 0.75 mol/L. 用此方法得到的超螺旋质粒 DNA 的纯度达 90% 以上，收率为78.94%. RNA、蛋白质残量以及内毒素均符合药品质量标准要求. CTAB 对质粒 DNA 的沉淀效果与质粒 DNA 的初始浓度有关，并且超螺旋质粒 DNA 浓度的降低与 CTAB 的添加量呈一定的线性关系. 超螺旋质粒的分子量 越小越不易被分离，并且结构特性比分子量在分离过程中更据主导作用. 关键词：质粒 DNA ；大规模纯化；溴化十六烷三甲基铵(CTAB) 中图分类号：Q781 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2007)02−0390−05 1 前 言 Leader Application Version 3.00 电泳分析软件，722 光栅 分光光度计，全自动发酵罐 BioFlo-IV 型(美国 NBS 公 随着基因治疗和 DNA 疫苗的迅速发展，质粒 DNA 司) ，高速冷冻离心机 SORVALL RC5C PLUS 型(美国 的提取方法受到人们更多的关注[1−4] . 从目前情况来看， DU PONT 公司)，质粒 DNA 提取试剂盒 Mini preps DNA 大规模制备超螺旋质粒 DNA 主要采用色谱法[5−7] ，但由 purfication( 美国 Promega 公司) ，细菌内毒素测定仪 于商品化的色谱介质孔径较小(100 nm)，而质粒DNA BET-32C(天津大学无线电厂). 分子量较大(5∼20 kb) ，大大降低了介质的吸附容量，并 材料：含有 pcDNA3 质粒的 E . coli DH5α CTAB(天 且临床上用于基因治疗的质粒 DNA 注射剂量又要求较 津远航化学品有限公司) ，CelPure100(北京赛力特公司 大，因此大规模制备超螺旋质粒 DNA 的方法还有待简 惠赠) ，琼脂糖(北京鼎国生物工