dd小麦显性矮秆基因复等位多态特性研究.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(2):391-398 Scientia Agricultura Sinica 黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达 与蛋白纯化研究 1 2 1 1 3 1 4 杨婉莹 ，温硕洋 ，邓小娟 ，叶明强 ，夏庆友 ，曹 阳 ，黄亚东 1 2 3 （华南农业大学动物科学学院蚕丝科学系, 广州 510642; 华南农业大学资源环境学院昆虫学系, 广州 510642; 西南大学蚕学与生物技术学院，农业 部蚕桑学重点实验室, 重庆 4007162; 4 曁南大学医药生物技术研究开发中心, 广州 510632 ） 摘要：【目的】Drosomycin（Drs）是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广 谱抗性的抗真菌肽因子,此外，在黑腹果蝇基因组中，还存在另外 6 条Drs同系物的基因序列，对它们推导的氨基 酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其 6 个同系物的抗性功能差异，研究其分子结 构与功能的关系，需要对这些同系物基因进行克隆表达，获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分 段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因，并克隆至pET-3C载体上，转化到宿主菌E.coli Origami（DE3） TM 中进行诱导表达，表达产物经阳离子CM Sepharose Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution 层析和包涵体的复性及Sephadex G-25 脱盐等纯化处理后，进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的 7 个Drs同系物 的短肽样品，除Drs-lI外，其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑 制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。 关键词：黑腹果蝇；抗真菌肽；Drosomycin；同系物；表达；蛋白纯化 Research on Expression in E.coli and Protein Purification of the Antifungal Peptide Drs and Isoforms from Drosophila melanogaster 1 2 1 1 3 YANG Wan-ying , WEN Shuo-yang , DENG Xiao-juan , YE Ming-qiang , XIA Qing-you , 1 4 CAO Yang , HUANG Ya-dong 1 （Department of Sericulture science, College of Animal science, South China of Agricultural University, Guangzhou 510642; 2Department of Entomo