Hsv—tk,重组人TNF一融合基因表达载体的构建及瞬时表达.pdfVIP

维普资讯 第 l2卷第 8划 lb，f2 No 8 2002年 4月 。 Apr 2002 · 论著 · Hsv—tk、重组人 TNF一 融合基因 表达载体的构建及瞬时表达 第四量医六学唐都 医院耳鼻喉科(西安 710038) 成诗银 鱼 兵 张惠中 目的：袖 建pEGFP—TK—rhTNF— 表达栽体 ．观察其在喉癌细胞 Hep 2中的瞬 时表达 方岳：应用 PCR方法对各 目的基 因进行扩增并经剥序栽体 pGEM T Easy测序 ，利用逆转录病毒载体 PLXSN 中的多 克隆住 点将二者融合为融合基 田TK—rhTNF一 “并将 其亚克 隆至 pEGFP—N3的EcoRl和 BamHl住 点间， 成曲构建表达载悼 pEGFP—TK—rhTNF n，并在谊栽体转染人喉癌细胞 Hep 2詹观察融合蛋 白表达情兄 站果 ：酶切鉴 定证 实TK—rhTNF— 融合基因片段 已克隆到 pEGFP— 3的 E。。RI和 BamHI值 g-,问，并在转 染人喉癌细胞 Hep一2中观察 到 TK ,hTNF—d融合基 因及绿 色荧光 蛋 白的表达。结论 ：pEGFP—TK— rhTNF—n表达栽悼便于观察转染细胞 中TK—rhTNF— 融舍蛋 白的表达情 兄1及蛋 白定位 ，为 自杀基 因联舍 钿胞 因干基 因疗法提供有利条件。 关键词 Hsv一血基 因 肿瘤坏死 固干 n 础合基 因 表达 分类号 Q782 C0NSTRUCT10N 0F pEGFP—TK —rhTNF一 EXPRESSING VECTORSAND DETECT10N 0FTRANSIENT EXPRESS10N ChengShiyin，YuBing，ZhangHuizkong DepartmenlofOtolaryngology，Tangdu Hospital，theFourthM ilitaryMedicalUniversity，Xi’an710038 A碡tract]0bjectlve：ToconstructpEGFP—TK—rhTNF一“expressingv~Ttorandtodetctitstransientex- pressloninlaryngocare[nomacellsHep一2 M ethods ThetargetgenesⅧ amplifiedbyPCR andsequenced inu EGM —T Easy WeocnstructedthefusiongeneTK rhTNF nintheretmviralexpressingx,,eC~orpLXSN Tbe fusiongenethenweresubclonedintoEcoRIandBa HIsiteso1pEGFP—N3．andpEGFP TK rhTNF一 Ⅱex· pressingvectorswe generatedsuccessfully W eobserveditstransientexpressionafteritwastransfectedintoh 一 gocarcinomacellsHep一2 Results：IdendficafionofpEGFP IK—rhTNF—obyemymedigra~tionshowedthatTK —rhTNF—afragmenthadbeen cloned