GABAA受体蛋白片段在大肠杆菌细胞表达条件研究.pdfVIP

· 68 · 微 生 物 学 通 报 2002年 29 (4) GABAA受体蛋 白片段在大肠杆菌细胞表达条件研究 肖亚中 杭 俊 薛 红 (安徽大学生命科学学院 合肥 230039)‘ (中国科技大学生命科学学院 合肥 23~xr26)2 (香港科技大学生化系 香港清水湾)， 摘要 ：为 了提高 GABA 受体 a．蛋 白片段在大肠杆菌中表达量 ，研究 了重组菌的发酵 条件 ，包括培养基 、接种量、温度 、摇床转速 、pH、诱导培养时间和诱导剂 IFIG使 用浓度等对 GABA 受体蛋白片段表达的影响。结果表明重组菌 以IB培养基为发酵基 质，按 3％接种量 ，37~C培养细胞 3．5h后 IFIG32~C诱 导 5h，菌体生物量为 3．25g／L， 目标蛋 白表达量达95mg／L。用 16L发酵罐进行放大培养，菌体生物量达4．95g／L，发酵 周期 5．5h，最高 目标蛋白表达量达到 136mg／L。 关键词 ：GABA 受体蛋白，大肠杆菌 ，表达条件 中图分类号 ：TQ92 文献标识码 ：A 文章编号：0253—2654 (2002)04-0068—04 srILJDⅢ s0N THE Ⅸ PRESSIoN ooNDm 0N 0FsEI栅 0F GABAARECEFIOR alSUBUNIT IN E ．COLt XIAOYa—Zhong‘HANGJune XUEnoC (Schodof Sc／ences，Anhu／ 血 ，Hefei230039) (Schodof Sciences，UniversityofScienceandTechnologyofOma，Hgrei230o26) ( ofBiochemistry，Hong UniversityofScienceandTechnology，ClearWaterBay，Hong ) A 眦 ：In ordertoimprovetheexpressionlevelofsegmentofGABA^receptorCtlsubtufitinE．co／i，~owth conditionsoftherecombatant，whichinfluencethefinalyieldofproteinexpression，including o’ in~ unl，in一 ~ 11211ioI1ratio，temperature，pH，iotatiollspeed，inducingtimeandconcentrationofIPrG andSOOil，W~．2testud— iedinshakjngflasks．Theresultsindicatedthat，with3％ in~ Aationratio，cultured3．5hoursat37℃ ，andth∞ induced5hoursbyIPIGat32~C，theyiddofGABA^receptorproteinWills95mg／LandthebiomassWills3．25 L．Inoantrast，usiI1ga16LStilT~ fe~ torinsteadof ilgflasks，thehlsh~tleveloftheproteinO~ 88ioI1， 136mg／Lwith4．95g／Lofbiomass，WillsachievedafterferIl1eI1lir1g5．5hours． Keyword：GABA^Receptorprotein，E．co／i，E p玎Bssi0Ilcondition A型 gamma一氨基丁酸 (简称 GABA ，下同)受体属于配体 门控离子通道受体超家 族 ，是许多重要神经活性药物作用的靶位点_lj，在神经中枢信号传递、膜受体作用机 理和神经活性药物筛选等方面有重要研究价值。近年来 ，对 GABA 受体蛋