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SD大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定.pdf

中国兽医学报 2008年12月 第28卷 第12期 ChinJVetSciDec.2008 Vo1.28 No.12 1445 SD大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定 王 林 ,卓丽玲 ,顾建红,路 浩,王富民,刘宗平 (扬州大学兽医学院,江苏扬州225009) 摘要 :采用机械研磨、筛网过滤和酶消化相结合 的方法获取 肾小管节段进行原代培养 ,以免疫组织化学法和细胞化 学染色法鉴定培养细胞。结果表明,肾小管上皮细胞围绕肾小管节段呈岛屿状向四周逐渐生长并于第4~7天处 于对数生长期,培养细胞角蛋 白ck18表达阳性,碱性磷酸酶染色阳性,证实培养细胞为近端肾小管上皮细胞,且纯 度较 高。 关键词:肾小管上皮细胞;细胞培养;免疫组织化学;细胞化学染色 中图分类号 :$865.13;Q813.1 文献标识码 :A 文章编号 :1005—4545(2008)12—1445—04 Primarycultureandidentificationofproximalrenaltubularepithelialcellsin SD rat WANGLin,ZHUO Li—ling,GUJian—hong,LU Hao,WANG Fu—min,LIU Zong-ping (Collegeof VeterinaryMedicine,YangzhouUniversity,Yangzhou,Jiangsu225009,China) Abstract:Therenaltubularsegmentswerecollectedbymechanicalgrinding,filtering andchemicaldigestive methodsandtherenaltubularepithelialcellswereprimarilycultured.Immunohistochemicalmethodandcytochemical stainingwereappliedtoidentifythecelltypes.Theresultsindicatedthatrenaltubularepithelialcellscouldgrow up tothevicinitygraduallyaroundtheanchoredrenaltubularsegments,displayingthetypicalislandslayout.Theygrew inlogarithm growingphasefrom 4to7days.Theexpressionofcytokeratin18andalkalinephosphatase(ALP)stai— ningoftheculturedcellswerepositive.Therebytheculturedcellswereprovedtobeproximalrenaltubularepithelial cellsanditspuritywasveryhigh. Keywords:renaltubularepithelialcell;cellculture;immunocytochemistry;cytochemicalstaining * C0r7s户。d gauthor 肾脏是机体的主要排泄器官,也是许多毒物和 岛素 、转铁蛋 白、三碘 甲状腺氨酸 (T。)等。本试验 药物 (如镉 、氟 、庆大霉素等)损伤的靶器官 。’肾小管 的 目的是建立操作简便、纯度高的近端 肾小管细胞 作为原尿吸收的主要场所,是多种毒物损伤 的主要 培养模型,为深入研究毒物对肾脏损伤的发病机理 部位。近端小管是 肾小管中最长最粗 的一段,原尿 及治疗药物筛选提供一个 良好实验平台。 中几乎全部的葡萄糖 、氨基酸和蛋 白质 ,以及大部分 水、离子和尿素均在近端小管重吸收;一些毒物或药 l 材料与方法 物的代谢终产物可以通过近端小管上皮细胞直接分 1.1 试验动物 SPF级 SD大 鼠,雌雄不限,体质 泌进入尿液。因此 ,建立纯化近端肾小

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