实验室放大.pptVIP

实验室研究,中试和放大 工业发酵过程的研究一般分三个阶段（三种规模） 一是实验室规模（确定菌种，培养基） 二是中试工厂规模（确定菌种培养的最佳条件） 三是工厂生产规模 一个微生物工作者，首先要在实验室对已筛出的新菌种（或改良后的新菌株）进行开发研究，获得高产基因表达的最佳条件，再逐步转移到工厂生产中去，也就是所说的新发酵工艺的放大。 实验室的研究和研究结果的放大对项目的成功非常重要。 实验室研究 实验室研究 一.实验设备 微生物药物的发酵，大多为需氧发酵，在实验室有气体自然交换的摇瓶发酵和强制通气的发酵罐发酵，前者需要摇瓶机，或者需要容量大小不同的发酵罐。 摇瓶机有往复式和旋转式两种，摇瓶有250、500、1000mL的，还有4L大的摇瓶，有时为增加实验数量还可以使用50ml的摇瓶或更小的试管。 往复式摇瓶机的往复频率为80—120次/min冲程为8—12cm，适用于培养细菌和酵母这样的单细胞菌体，用于培养丝状菌，则在培养基表面上往往形成固体菌膜。 旋转式摇瓶机的旋转速度一般为60—300r/min偏心距为3~6cm。由于旋转式具有传氧速率较好，功率消耗较小，培养基不会溅到瓶口等优点，所以较常用。采用500r/min高转速的旋转式摇瓶机所得的结果与深层搅拌培养相接近。使用时最好实验室中能调温调湿。 实验室进行，发酵罐培养，常用大小不同的小发酵罐，一般由玻璃或不锈钢制作。附有：温度，PH，溶氧，氧化还原电位，泡沫，液限等监测传感器，还有计算机监测和自动控制过程。 一般1L发酵罐用于制备种子和适应性试验4—28L发酵罐适用于基础考查实验。 二.摇瓶试验： 摇瓶试验就是在一定大小体积的锥形烧瓶中装入一定量的培养基（一般为瓶体积的10%—20%）配上瓶塞（棉塞、沙布、纤维纸、特殊的聚乙烯醇等滤器）经灭菌后、接入菌种在摇瓶机上进行恒温振荡培养，培养一定时间后分析测定培养液中的有关参数和产物得量。 （一）瓶塞对氧传递的阻力 瓶塞一般为，棉花或多层纱布等，杜绝外界空气中的杂菌或杂质进入瓶内，瓶外的氧气通过过滤介质，有一定传递阻力，过滤介质不同，氧通过瓶塞的氧传递分数不同. 在某些情况下可能成为过滤介质的传递阻力是氧传递的限制因素。所以，应尽量选用传递阻力小的瓶塞材质和厚度。（当然在不能污染菌的前提下） （二）水蒸发的影响 摇瓶在振荡期间，水分经由瓶塞而蒸发由于水分蒸发，往往产生各种不同影响，影响培养液的体积与摇瓶体积的比值，继而改变氧传递速率，改变菌体产物的浓度。 水蒸发量与发酵温度，周围空气的相对温度和水汽的传递系数等因素有关。 如红霉素链霉菌于34oC，100mL摇瓶中装入20ml培养基，162小时振荡培养，测定的水蒸发量级为10ml，在发酵起始时，补加10ml水，取得了红霉素产物的最高发酵单位。 （三）比表面积的影响： 摇瓶发酵所需的氧是由表面通气供给的 它的氧传递速率的大小是由： ①摇瓶机振荡的频率和振幅大小 ②摇瓶内培养基体积与摇瓶总体积的比率 ③摇瓶的形式 氧的传递速率在一定程度上与培养基的装量呈反比关系，装量愈大，氧的传递速率就愈小反之就大。 这可由表面积的变化来解释： 当装料体积减少，瓶中的比表面积就增加，反之就降低，因而影响氧的传递。 在实际工作中，往往通过试验来求得培养基的最适装入量。 改变摇瓶的形状或在瓶中不同位置上增加挡板，氧的传递速率都可得到提高，平底摇瓶的氧传递速率比圆底高，但加挡板可产生泡沫，表面泡沫反而会降低气体交换速率，所以较少使用。 三.实验室研究和统计学方法 实验室研究常常需要研究多种因素的影响，需要有良好的实验方案，才能在有限的时间内获得可靠的结果，为放大生产提供依据，如培养基浓度，温度，PH、溶氧等。 因此常采用统计设计学的方法来进行最佳化条件的考察试验，一般采用正交设计法。更简法的是用 “均匀设计法” 发酵规模的缩小和放大 微生物过程的工业研究，有各种大小不同的试验规模，如何使小型规模试验所取得的结果在大生产规模上能得到重现，是一个很重要的课题。 为此，必须使大、小规模实验中的菌体所处的外界环境能保持完全一致。 放大过程所必需的前提是在大型设备和小型设备中的菌体处的整个环境条件，包括化学的因素（基质浓度、前体浓度等）和物理因素（温度、粘度、功率消耗剪应力等）必须是完全相同的，这样才能构成这两种规模产物积累类型为相同性. 化学因素可以通过人为控制保持恒定，但物理因素与设备规模的大小关系很大，随规模不同而发生改变，有时环境条件完全相同，也不能保证微生物的生理活性完全相同，因为微生物的生化代谢还受很多生物因素的影响，无法用简单的物理因素来消除，所以这个问题不完全跟化学工程的放大相同。 一.放大的过程