高效制备液相色谱法分离制备虻虫中的多肽.pdfVIP

第27卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第8期 199!)年8月 ChineseJournalofAnal西calChemistry 924~962 高效制备液相色谱法分离制备蛇虫中的多肤样品 尚庆坤. 祝 红 阎吉昌 向 前 (东北师范大学分析浏试中心，长春 130024) (长春高等工业专科学校，长春130020) 摘 要 应用高效制备液相色谱法，分离虹虫中的多肤样品，制备收集了4种主要组分。经 检测.各组分达到很高纯度。 关键词 高效制备液相色谱，分离和制备，虹虫，多肤 1 引 言 伴随着生物药物越来越多的临床应用和发展，对其混合物的分离分析及纯度鉴定一直是 一个重要的问题。从动植物体中提取出来的生物样品(蛋白质，多肤，核酸，多糖等)，由于其结 构复杂，生物学特性各异，很难通过常规的化学方法进行分离纯化，迫切需要集高效、高选择性 和易放大性为一体的新方法。高效制备液相色谱本身具有操作条件温和，选择性高，批处理量 大和操作简便等优点，使之成为分离纯化生物样品最有效的方法之一。研究表明，从中药蛇虫 中提取出的多肤，具有溶解血栓的作用，但由于多肤种类较多，又缺少标准品，因此很难确定到 底是哪种肤具有这种药理作用。本文用高效制备液相色谱仪，对蛇虫中的多肤样品进行了成 功的分离和制备，得到了4种高纯度组分，为进一步的研究及应用创造了前提和条件。 2 实验部分 2.1 仪器 日本岛津LC-8A制备色谱仪;SPD-6AV紫外一可见分光光度检测器;SIL-8A自动进样器; FCV-IOOB自动组分收集器;C-R7A数据处理仪;SYZ-B型石英亚沸高纯水蒸馏器;CX-250超声 波清洗器;美国惠普公司LEQ时间飞行质谱仪。 2.2 试剂 甲醇(优级纯，北京化工厂);乙睛(HPLC专用，上海脑海生物科技公司);高纯水(石英高纯 水亚沸蒸馏器蒸馏的二次水)。 2.3 色谱条件 分析条件:ODS色谱柱(日本岛津，4.6nuni.dx250mm,粒径5PM)乙睛/水(0.01mol/L磷 酸盐缓冲溶液，pH=7)为流动相，流速为0.4mUmin;检测波长214nm，进样量10pL。制备条 件:ODS色谱柱(日本岛津，20.0nuni.dx250mm，粒径10PM);乙睛/水(同上)为流动相，流速6 mUmin;检测波长214nm，进样量4mL, 2.4 实验方法 在分析系统下，优选出最佳色谱条件，然后转换到制备系统，将对应条件放大并做适当调 整后，自动进样开始制备，收集主要组分。 2.5 组分纯度测定 将所制得的4种组分冻干后，分别得白色或淡黄色固体。各取适量溶于水，在分析条件下 1998-09-29收稿;1998-01-19接受。 第8期 尚庆坤等:高效制备液相色谱法分离制备虹虫中的多肤样品 925 进样，测定纯度。 3 结果与讨论 3.1色谱条件的选择 文献报道，分离提纯多肤的最常用方法是反相高效液相色谱法，常用固定相为十八烷基、 八烷基、苯烷基和氛基键合相硅胶的色谱柱，本文选用较流行的ODS柱(C,:柱)。常用的流动 相是含酸性或中性介质的甲醇一水或乙睛一水洗脱体系，考虑到乙睛粘度低，在210ntn附近有很 好的透光度，与水组成的二元流动相对多肤的溶解力强，对泵的压力小等特点，我们选择乙睛- 水作流动相，并对二者的混合物比为1:1,1:2,1:4,1:8,1:10时的分离情况进行比较，确定1:8 较为合适。由于肤键及肤分子中大多数发色团的吸收峰在200一230run之间，为保证较高的 检测灵敏度，将检测波长设在214mno 制备时，由于采用与分析系统相同固定相的色谱柱(内径和 粒度不同)，相同的流动相，一般来说只需将流量按比例放大即 可。但由于制备时常处于柱超载状态，对分离度有一定影响，因 此还应做一定的调整。为求得单位时间内处理最大量样品和保 持良好的分离度，将乙睛与水的比例确定为 1:9，流速为6 宜nUmin，每次进样4mL, 3.2 样品制备结果 由市售中药虹虫制得的多肤样品，经质谱检测主要含4个组 分，分子量依次为5735,8284,11399,12715。分离制务的