梨SRAP体系的正交优化的的研究.pdfVIP

江苏农业科学 　2009年第 2 期 — 5 1 — 梨 SRAP体系的正交优化研究 董星光 , 樊 　丽 , 王志刚 , 王 　斐 , 林盛华 , 方成泉 (中国农业科学院果树研究所 ,辽宁兴城 125100) 2 + 　　摘要 : SRA P是一种基于 PCR 的新型分子标记 ,本试验利用正交试验设计对梨 SRA P - PCR 反应体系中的 M g 、 2 + dN TP s、Taq DNA 聚合酶 、模板 DNA、引物 5个组分浓度进行优化 。确定优化的反应体系为 : M g 浓度 2. 4 mmo l/L , μ μ μ dN TP s 200 mol/L , Taq DNA 聚合酶 1 U ,模板 DNA 80 ng,引物浓度 0. 2 mol/L ,反应总体积 25 l, 同时对该优化体 系的稳定性及在梨种间的多态性进行了检测 。 　　关键词 : 梨属 ; SRA P; 体系优化 ; 正交设计 　　中图分类号 : S266. 203. 6　　文献标志码 : A 　　文章编号 : 1002 - 1302 (2009) 02 - 0051 - 02 　　相关序列扩增多态性 ( sequence - related amp lified po ly 仪 。SRA P 引物 由北京赛百盛基因技术有限公司合成 , Taq morp h ism , SRA P) 是一种基于 PCR 的新型分子标记 , 200 1年 酶 、dN TP和 DNA M arker DL2000购 自大连宝生物有限公司 。 由美国加利福尼亚大学 L i等 [ 1 ] 研究芸薹作物时开发面世 。 1. 3　基因组 DNA 的提取 ( ) [ 9 ] SRA P可以扩增基因的可阅读框 OR F 区域 ,在基因组中分 基因组 DNA 提取采用改良的 CTAB 法 。基因组 DNA 布均匀 ,并具有高频率的共显性 ,操作简单 ,可靠性高 ,易于测 质量通过 Gene sp ec V 核酸蛋白分析仪和 0. 8%琼脂糖凝胶 序 。SRA P克服了 RA PD 重复性差 、多态性低 , SSR 技术引物 电泳检测 。 开发费时费力 , A FLP技术复杂 、成本昂贵的缺点 。目前 ,它已 1. 4　PCR 扩增 在果树 、蔬菜 、大田作物等各种农作物中使用 ,并应用于图谱 参照已有的报道 ,合成 12条正向引物和 12 条反