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维普资讯 FKN PKC在其 中的作 用 第 ll 趋化因子 FKN对单个核细胞 MMP一2表达的影响及 PKC在其中的作用 孙 健 雷明明 杨春艳 吴 哲 李淑萍 王 红。 (吉林大学第二医院心血管 内科，吉林 长春 130041) [摘 要] 目的 探讨趋化因子Fractalkine(FKN)对单个核细胞基质金属蛋白酶 (MMP)-2表达的影响及蛋白激酶C(PKC)在其中的作用。方 法 采用聚蔗糖．泛影葡胺密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞。将提取的单个核细胞分为：空白对照组、FKN组及 Ro31-8220(PKC阻断剂) 组。应用明胶酶谱法检测各组单个核细胞 中MMP-2表达情况。结果 MMP-2在 FKN组 [(619±34．77)INT ·mm ]较空 白组 [(3285± 54．69)INT ·mm ]表达明显减少 (P0．05)，在Ro31．8220组[(2478．33±64．31)INT ·mm ]较FKN组表达明显增多(P0．05)。结论 趋化因子 FKN可以抑制单个核细胞MMP-2的表达 ，这一作用可能是通过PKC途径实现的。 [关键词] 动脉粥样硬化；FKN；PKC；MMP-2 [中图分类号] R541．4 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9202(2008)11—1071~2 研究发现 ，炎症 内皮细胞释放 的趋化 因子 (fractalkine， 中孵育2h后 ，加入 FKN溶媒对照，置于 37~C，5％CO 培养箱 FKN)与NK细胞、单核细胞、淋巴细胞上的受体 CX3CR1结合 中孵育24h。②FKN组 ：在单个核细胞中加入抑制剂溶媒对 以后，可以增强自然杀伤细胞 (NK)的杀伤力 ，导致血管内皮细 照，37~C，5％CO 培养箱中孵育2h后，加入 FKN(终浓度为 胞损伤 ]，同时使单核细胞、淋巴细胞向血管内皮细胞趋化、黏 0．5 m1)，37~C，5％CO 培养箱 中孵育24h。③Ro31-8220 附 ，从而促进动脉粥样硬化的形成。基质金属蛋 白酶 (MMP)S 组 ：在单个核细胞 中加入 Ro314220(终浓度为50~mol／L)， 是一组含锌的蛋白水解酶 ，能特异性地降解细胞外基质和胶原 37~C，5％CO 培养箱 中孵 育 2h后，加入 FKN(终浓度为 纤维 ，使动脉粥样硬化斑块破裂，尤以MMP-2作用更为强烈。 0．5 g／m1)，37℃，5％CO 培养箱中孵育24h。 MMP-2能特异性降解纤维帽中的胶原Ⅳ，使斑块破裂，导致急 1．4 MMP-2含量的检测 分别收集各组单个核细胞培养液 性心肌梗死 。目前国内尚未见FKN与MMP-2关系的研究报 上清，将各组上清以 1800r／min离心 1min后，在 37~C水浴 道，Vitale 研究发现FKN可以抑制单核细胞 MMP-2的表达， 10min。将事先配置好的 10％聚丙烯酰胺 (polyaerylamide)胶 但对其机制未进一步研究。本研究观察 FKN对人单个核细胞 (含有 1g／L明胶)固定于电泳装置上后，电泳仪上、下槽各加 MMP-2表达的影响，并探讨PKC在其中的作用。 入 Tris一甘氨酸 电泳缓冲液 (25mmo／／LTris、250mmol／L甘氨 酸、0．1％SDS)，排除凝胶底部两玻璃板之间的气泡 ，之后在每 1 材料与方法 个加样槽中分别加入 3trl待检测样品与6trlTris-GlycineSDS 1．1 实验材料 人外周血浓缩 白细胞、低糖 DMEM(LG— sample，将电泳装置与电源相接，80—120V电压 电泳 1h。从 DMEM，Gibco)，优等胎牛血清 (FBS，Hyclone)，Fico11分离液 (浓 电泳装置上卸下玻璃板 ，小心取下胶。Renaturi