桂枝汤及黄连解毒汤对自发性糖尿病大鼠心肌基膜的影响.pdfVIP

第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 而导致基膜通透性损伤、基膜增厚，导致血氧弥散障碍，进一步导致心肌损伤。这种炎症病变与中医理 论的“热毒耗伤心络，营卫不和”有密切相关性。 Ⅳ型胶原主要存在于心肌细胞膜和毛细血管基底膜[3]，同时是基底膜的骨架蛋白[4]。本实验在既 往研究基础上观察桂枝汤及黄连解毒汤对自发性糖尿病大鼠(GK大鼠)心肌基膜厚度、心肌I、『型胶原阳 性表达的影响，观察心肌匀浆白介素一1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF—Q)、NIP—KB含量的变化并探讨有 关炎症损伤的机制。 1材料与方法 1．1动物及分组 随机分为4组：桂枝汤组、黄连解毒汤组、二甲双胍组、GK对照组。另取普通级Wister大鼠10只作为正常 (山东大学新药评价中心提供，动物合格证号200203) 对照组，4月龄，雄性，体重330--4109。 1．2药品及试剂 实验用药：按照桂枝汤、黄连解毒汤原方比例制备水煎剂，浓缩至19生药／ml(山东中医药大学附属 医院制剂室完成)，将二甲双胍等配制成合适悬浊液。 antiNuclearfactor-K B酶联免疫试剂盒(美国adlitteramlaboratories 试剂：goat diagnostic CD INC，ADLA一011，LOTRTll0371)；白介素一1(IL一1)酶联免疫试剂盒(美国RDInc，Cat Systems No：SXR019Lot B 限公司，原北京东亚免疫技术研究所)。NF—KB免疫组化染色一抗：小鼠抗大鼠NF—K p65(美国SANTA CRUZBIOTECHNOLOGY 原(美国Chemicon公司，CATALOGNUMBER：MABl910；LOT (广谱、加强型，上海长岛生物技术有限公司)，DAB显色试剂盒。六胺银染色试剂盒(上海长岛生物技 术有限公司)。 1．3主要实验仪器 T 匀浆机(IKA—ULTRA—TURRAX25 basic)；ELx808酶标仪(美国BIO-TEK 冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)。 图像分析软件：HPIAS一1000高清晰度彩色病理图文分析系统，同济医科大学千屏影像工程公司。 1．4分组用药 各组给予正常饲料喂养的同时分组灌胃给药12周，给药剂量相当于人KIJ]畏lO倍量。空白对照组和GK 对照组分别给予生理盐水2mL．kg～．d～，余各组分别给予桂枝汤水煎剂4．09．kg～．d～，黄连解毒汤水煎剂 9．09．kg～．d～，二甲双胍0．1259．kg～．d～。 1．5标本处理及制作 因灌胃等死亡，灌胃12周后动物数量如下：桂枝汤组8只、黄连解毒汤组9只、二甲双胍组8只、GK 对照组8只、空白对照组8只。 350 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 Profile 禁食不禁水12小时，行氯胺酮腹腔注射麻醉，解剖，腹主静脉取血，采用强生公司OneTouch 血糖仪测定血糖。取心脏，立即用预冷的生理盐水冲洗，在冰上操作，沿左心室方向解剖，用4％多聚甲 醛固定，连续作病理切片，片厚5№，待用。取新鲜心肌组织，每克心肌组织215mI生理盐水置匀浆机上 10 10000r／min 1．6指标检测 NF-K 1．6．1 B、IL一1、TNF—Q含量检测： NF—K B，IL一1采用酶标双抗体夹心法测定，根据曲线方程计算各样品浓度。TNF—Q采用放免法测定， 由仪器自动计算各样品含量。 1．6．2病理染