2013浙科版选修1第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》ppt课件5.pptVIP

固体LB培养基 每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭菌。 灭菌 培养皿壁上不能沾有培养皿，否则容易污染。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3. 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？ 答：恒温培养时，培养基的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会是水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴回落到培养基的表面并且散开。如果培养皿已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此，恒温培养时，培养皿必须倒置。 小结 1 什么是微生物？有哪些应用？ 2 培养基的基本营养成分及其配制方法 3 无菌技术：消毒和灭菌（高压蒸汽灭菌法） 4 微生物培养的基本程序（倒平板技术） 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须从中进行分离。在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。 怎样纯化分离我们需要的大肠杆菌呢？ 怎样确保大规模培养繁殖起来的细菌是一个纯种群体呢？ 菌落：单个细菌细胞在固体培养基上培养10--20小时后，会繁殖成许多个细菌细胞。这些细胞紧紧聚集在一起，形成菌落。 每一个细菌产生一个菌落。 不同细菌的菌落形态的区别体现在大小、形态、隆起、边缘、表面状况、质地、颜色、透明度等方面。　 将待分离样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。 大肠肝菌的分离 微生物的接种技术： 将一种微生物移接到另一灭菌培养基上的过程。 例如：将液体培养基中的大肠杆菌接种到固体培养基上，以便于进行分离。 微生物的分离技术： 稀释 涂布分离法 平板划线分离法 稀释法 平板划线分离法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 3. 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？ 答：恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落如培养基表面且扩散开。若培养基中一行成菌落，则菌落中的菌会随水扩散开，菌落间相互影响，很难再分离成单菌落，答不到分离目的。 因此，倒置培养皿可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 涂布分离法 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 微生物(microorganism) 结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 例：酵母、霉菌、细菌、放线菌、病毒和小型原生动物等等 微生物的利用： 抗生素；酒；腐乳；污水治理…… 历史小资料 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。 保持培养物纯净，保证无杂菌污染很重要！ 大肠杆菌的培养与分离 一、大肠杆菌（E. coli） 兼性厌氧的肠道内的共生菌群 合成维生素B和维生素K，供机体利用；产生大肠杆菌素，抑制肠道致病菌和腐生菌滋生。 革兰氏阴性菌 作为一种工程菌， 在基因工程技术中被广泛采用。