2013浙科版选修1第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》ppt课件8.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 稀释法 平板划线分离法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 4. 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？ 答：恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面且扩散开。若培养基中一行成菌落，则菌落中的菌会随水扩散开，菌落间相互影响，很难再分离成单菌落，答不到分离目的。 因此，倒置培养皿可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 涂布分离法 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 微生物(microorganism) 结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 例：酵母、霉菌、细菌、放线菌、病毒和小型原生动物等等 微生物的利用： 抗生素；酒；腐乳；污水治理…… 历史小资料 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。 保持培养物纯净，保证无杂菌污染很重要！ 大肠杆菌的培养与分离 一、大肠杆菌（E. coli） 兼性厌氧的肠道内的共生菌群 合成维生素B和维生素K，供机体利用；产生大肠杆菌素，抑制肠道致病菌和腐生菌滋生。 革兰氏阴性菌 作为一种工程菌， 在基因工程技术中被广泛采用。 例：大规模生产治疗糖尿病的药物——胰岛素 培养基（culture media） 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 提供微生物生长的条件： 合适的温度：25-37℃ 合适的pH：细菌 6.5-7.5 中性偏碱 真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分：含有碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。 LB培养基的配方 培养基成分 各成分的量 蛋白胨 0.5g 酵母提取物 0.25g NaCl 0.5g H2O 加至50ml 固体培养基的配制：每50ml 液体培养基添加1g 琼脂 培养基种类 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 （1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。 1.培养基的类型 固体培养基：菌落 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基： 无动力 有动力(弥散) 2.培养基的用途 液体培养基：增菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种 半固体培养基：动力检测 无菌技术 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。 　（1）消毒： 　　利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。 消毒与灭菌 　　（2）灭菌： 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。 消毒的方法 1、100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法 70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 …… 灭菌的方法 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌