菜籽饼粕粗蛋白降解菌的筛选、初步鉴定和发酵条件摸索.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2005：303～307 菜籽饼粕粗蛋 白降解菌的筛选、初步鉴定 与发酵条件摸索 邱 鑫 肖汉乾 向天勇 杨三东 吴永尧 (1湖南农业大学 生化-q发酵 工程实验室 长沙 410128 2湖南省烟草公司 长沙 410001) 摘要 在接种 了本实验室保存的诱变菌株 A的未灭菌的菜籽饼粕发酵样品中筛选得到 3株能以 菜籽饼粕为原料生长的菌株，编号为S。、s2、s3，菌株 A和这 3株菌种通过鉴定确定为凝结芽孢杆 菌、圆孢芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和球形芽孢杆菌。通过设计正交实验摸 索出这 4株 菌种的最佳 培养条件。并对饼粕 固体混合茵发酵进行 了初步摸 索和探讨。 关键词 菜籽饼粕 菌种鉴定 正交试验 混合发酵 菜籽饼或粕是菜籽压榨取油后的残 留物，其中 1．2 培养基 含有 35％～40％的粗蛋 白质 ，是重要的植物蛋 白质 斜面完全培养基 (％)：牛 肉膏 0．5，蛋 白胨 资源之一_1j。有实验证 明在烟 田间施用菜籽饼 0．5，NaC10．5，葡萄糖 0．5，琼脂 1．5，pH7．2～7．5。 粕 ，可改善烟 田土壤结构 ，增加温度促进微生 物活 液体发酵培养基 ：牛 肉膏 0．5，蛋 白胨 0．5， 动以及保蓄养分 ，更重要的是它可明显地提高烟叶 NaC10．5，葡萄糖 0．5，pH7．2～7．5。 外观质量、增加香气和改善风味。因此它是一种能 1．3 菌种的筛选 够改善烟叶香气的特殊有机肥 “。而长期以来 ， 将菌株 A接种到斜面培养基上 ，32~C下培养 在开发饼肥做烟草专用肥上 ，一直存在着饼肥中所 48h，活化菌种 ，然后接种 到液体发酵培养基 内， 含氮素的释放时间与烟草植株生长对肥水的需求 lOOml的三角瓶装液量 为 25ml，接 种量为 8％， 规律不相符的问题 J，这主要是饼粕中大分子蛋 32~C、120r／min培养 48h。把培养好 的菌株 A按接 白降解 释 放氮 素 的 时机 不 对 和 程度 不 够 所 种量 8％接种到装有 12．5kg菜籽饼粕、含水量为 致h ”]。本实验将本实验室保存菌株 A接种到装 100％的40L塑料箱 内，盖好顶盖 ，室温调节至30℃ 有 12．5kg饼粕 的40L塑料箱 内，在没有灭菌的条 在没有灭菌的条件下进行固体发酵，发酵 14d后用 件下进行固体发酵，并从饼粕发酵样品中筛选得到 凯氏定氮法测定饼粕中粗蛋 白含量。另设计一箱 3株能以菜籽饼粕为原料生长的菌株 ，编号为 s，、 未接入菌株 A的饼粕作为对照 ，同样条件下发酵 s2、s，，菌株 A和这 3株菌株进行 了鉴定命名 ，利用 14d后用凯氏定氮法测定饼粕中粗蛋 白含量。 正交设计法确定 了该变异菌株的最佳培养条件 ，并 发酵两个星期后在接入菌株 A的发酵箱内取 对其在饼粕中混合发酵最适条件进行了初步摸索 饼粕发酵样品少许 ，溶于5Oral无菌水 ，取 lml，稀释 和探讨 。 100倍 ，均匀涂布到完全培养基上 ，32~C下恒温培 养。24h后 ，在完全培养基上挑取长势 良好的的菌 1 材料与方法 落，再经过 四分 区划线 ，得到单一菌种 ，保存到斜面 1．1 材 料 培养基上。 本实验室保存的诱变菌株 A。 1．4 饼粕 中粗蛋 白含量的测定 取