α1抗胰蛋白酶Pi表型的分布及其和肝癌相关性的分析Distributionofα1antitrypsinPhenotypes.pdfVIP

遗传 HEREDTTAS(Beijing)16(3):1一 1994 ·研究报告 · al抗胰蛋白酶Pi表型的分布及其 与肝癌相关性的分析 关赛芳 吕宝忠 许凯黎 陈复华 上（海市肿瘤研究所 200032) 摘 要 本文以凝胶等电聚焦电泳方法测定 150例原发性肝癌患者、100例良性肝病患者和 112例正常人 血清：,AT(Pi）表型的分布．统计学检验说明：．(I）我们的烽样结果符合Hardy-Weinberg平衡定律；(2) M：等位基因的相对危险度在2.18-21.96，平均为7.502土3.836．因此，M：的出现在肝癌的检测中有重 要意义。 关键词 a,抗胰蛋白酶 (Pi)，原发性肝癌，M,等位基因，等电聚焦电泳，相对危险度 Distributionofal-antitrypsinPhenotypesandItsRelation toHumanPrimaryLiverCancer GuanSaifang LOBaozhong XuKadiChenFuhua (ShanghaiCancerInstituteShanghai200032) ：，抗胰蛋白酶 (aJAT)是人休血清中一种正常的蛋白酶抑制剂．它具有抑制多种蛋白酶的 生理功能，是嗜中性弹性蛋白酶的主要抑制剂，由一对共显性的复等位基因 P（i系列）所编 码，具有高度多态性与遗传变异的重要特性。迄今已发现从PiB-Piz计75种以上表型(4)，最 常见的等位基因表型称作＿Pim，包括野生型M，和突变型M2与M33种，可构成M,M,, M2M2,MiM3,M}M2,M,M3和M2M36种表现型(5)。此外尚有引起临床学者 7)〔，特别是 肝癌研究者感兴趣的与某些疾病相关联的突变基因表型Piz,Pis与Pinup(12.(5.17)。中国成人 及儿童重症肝炎有关Pi表型国内已有报道 3)〔，但Pi不同表型与肝癌之间的关系究竟如何，尚 未见报道．本文拟以等电聚焦技术测定：1AT的表型分布，来探讨其表型和等位基因与肝癌之间 的关系。 l材 料 和 方 法 1.1血清标本 正常人血清来自上海市中心血站及公用事业局下属4个工厂的健康职工，共112例。肝癌患 者血清由上海医科大学肿瘤医院提供，计150例，其中124例经病理证实，占82.7%，其余26例 2 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1994 16卷 皆符合 19”年全国肝癌协作会议拟定的诊断标准。良性肝病例为上海医科大学附属中山医院及 上海市传染病总院病人，计100例． 1.2alAT抗血清 1.2.1羊抗人：,AT抗血清的制备 本实验室采用ConA-Sepharose4B亲和层析柱分离人血清 获得纯化的：,AT，经蛋白电泳及免疫电泳证实为免疫纯的：,AT，以此纯化的：IAT制备多克隆 抗体和单克隆抗体。 1.2.2羊抗鼠IgG-HRP及兔抗羊IgG-HRP 均为本实验室制备。 1.2.3a,AT复等位基因血清 由加拿大多伦多儿童医院D.W.Cox博士赠送。 1.3试剂 二性电解质载休pH3.5-5和pH4-6为LKBBromma产品．丙稀酸胺及双丙烯酸胺均为美 国Promega产品，ACES[N-(2一乙氨基）-2氨基 2磺酸】为 gigma产品，二硫基苏糖醇 (DTT),碘乙酸 I（AC)，过硫酸铁，考马士蓝G25。均为国产试剂。 1.4方法 a,ATPi表型基本按Picre。等的方法进行聚丙烯酞胺等电聚焦电泳测定 ”〔），并略有改变． 1.4.1凝胶板 120x115x0.4毫米，内含丙烯酞胺5.88 ，甲叉双丙烯酸胺0.12%，蔗糖 13.0%,Ampholine(pH3.5-5)1.08%,Ampholine(pH4-6)1.52%,ACES0.98%，过硫酸按 0.067 ． 1.4.2血清样品处理 0.1mol/LDTT5川加20川血清再加20川蒸馏水混匀，放4℃冰箱内还 原4小时后，再加0.04mol/LIAC12ul烷基化过夜。 1.4.3等电聚焦电泳(I（EF) 正极液为0.025mol/L门冬氨酸和0.02