高效液相色谱!质谱分离鉴定荧光试剂标记脂肪酸.pdf

第%’ 卷 分析化学 （1-8. OY,8Y1 ） 研究报告 第B 期 #))$ 年B 月 ;Z4D767 [IMTDJ3 IH ,DJ3LR42J3 ;Z7C46RTL B(= G B=B 高效液相色谱!质谱分离鉴定荧光试剂标记的脂肪酸 ! ! # # ! !，# 朱 芳 赵文臣 赵先恩 索有瑞 刘素娟 尤进茂# ! （曲阜师范大学化学科学学院，曲阜#$%!’ ） # （中国科学院西北高原生物研究所，西宁(!)))!） 摘 要 以#*（#*（!)*蒽基）*萘［# ，%*+ ］咪唑）* 乙基*对甲苯磺酸酯（,-./0 ）作为柱前衍生化试剂，在1234567 89:*; 色谱柱上，梯度洗脱实现了#) 种游离脂肪酸（, ）衍生物的完全基线分离。=) 下在9? 溶剂中以 ( @ ;A 作催化剂，选取衍生试剂摩尔数为脂肪酸的$ 倍，衍生反应B) C4D 可获得稳定的荧光产物。激发和发 # % 射波长分别为#’) DC 和’!# DC 。采用大气压化学电离源（,E;. ）正离子模式，实现了油菜蜂花粉中游离脂肪 酸的质谱鉴定。所有脂肪酸的线性相关系数均大于) F ==== ，检出限为#B F $ G =(F $= HCI3 。 关键词 高效液相色谱*质谱，荧光检测，柱前衍生，脂肪酸，蜂花粉 # 引# 言 脂肪酸广泛分布于自然界中，是生物体内重要的营养物质和代谢产物，对调节生物体内各项生理 ［!］ 和生物功能起着重要作用。由于这类化合物在紫外*可见光区吸收较弱，光度法难以准确测定 ，OEP; ［# ］ 荧光检测法具有较高的灵敏度。用于脂肪酸测定的荧光标记试剂主要有溴代香豆素类化合物 和重 ［% ］ 氮甲烷类 ，通常情况下这些化合物对潮气及水不稳定。文献［B ］采用-A1E10 磺酸酯对脂肪酸类化 合物进行了测定，但衍生过程需在@AO 、冠醚及相转移催化剂的存在下于苯或甲苯溶剂中完成，分离前 需预处理，费时费力。本实验采用新型荧光试剂#*（#*（!)*蒽基）*萘［# ，%*+ ］咪唑）* 乙基*对甲苯磺酸酯 作为柱前衍生化试剂，以! ，!*二甲基甲酰胺（9? ）作溶剂，在=) 下以@ ;A 作催化剂可获得稳定的 # % 荧光产物。衍生产率高，条件温和，操作简便，衍生液不必预处理可直接进样分析。在激发和发射波长 分别为#’) DC 和’!# DC 荧光检测下，采用梯度洗脱对油菜蜂花粉中的游离脂肪酸实现了快速、灵敏的 测定，并对实际样品中各衍生组分进行了在线的柱后质谱鉴定，结果满意。 $# 实验部分 $ F # 仪器与试剂 !!)) 型高效液相色谱*质谱联用仪（美国,Q437DR 公司），配备四元梯度泵、在线真空脱气机、荧光检 测器、!)) 位自动进样器、大气压化学电离源（,E;. ）；1234567 89:*;( 色谱柱（B F DC S !’) CC ，’ !C ， ,Q437DR 公司）。#*（#*（!)*蒽基）*萘［# ，%*+ ］咪唑）* 乙基*对甲苯磺酸酯（自制）；#) 种脂肪酸标准样品 （上海试剂厂）；光谱纯乙腈（,;- ，德国?7T2U 公司）；油菜蜂花粉