果实蛋白质组学的研究的实验方法.pdfVIP

植物学报Chinese Bulletin of Botany 2009, 44 (1): 107 116, w w w .chinbullbotany .com .技术方法. 果实蛋白质组学研究的实验方法 1, 2 1 1 1* 王清 , 产祝龙 , 秦国政 , 田世平 1 中国科学院植物研究所, 光合作用与环境分子生理学重点实验室, 北京100093; 2 中国科学院研究生院, 北京 100039 摘要 双向电泳技术是蛋白质组学研究的基本方法之一。果实由于富含糖、多酚、单宁和有机酸等物质，蛋白质的提取比 其它植物组织更加困难。本文主要介绍不同果实蛋白质的提取、等电聚焦系统和凝胶染色技术，并建立了一套适用于桃、樱 桃、苹果、芒果和冬枣等多种果实蛋白质组学的研究方法。结果表明，采用匀浆法和酚抽提法提取果实的蛋白质，裂解缓冲 液2溶解蛋白质，并用固相pH梯度进行等电聚焦，可以获得背景清晰和分辨率高的凝胶图谱，具有较好的重复性，可用于果 实蛋白质组学的研究。我们的研究结果显示，固相干胶条与IEF管胶相比，具有更加明显的优势。而不同的染色方法，对结 果影响不大。 关键词 果实, 凝胶染色, 等电聚焦, 裂解缓冲液, 蛋白质提取 王清, 产祝龙, 秦国政, 田世平(2009). 果实蛋白质组学研究的实验方法. 植物学报44 , 107 116 . 果实生长发育阶段的生理代谢变化, 以及采后处理 1970) 。因此, 建立蛋白质提取的有效方法和标准化技 对果实品质的影响一直受到人们的关注。在过去的研 术体系对于果实蛋白质组学研究十分必要。 究中, 我们发现生物和非生物因子处理果实可以激发抗 本文在借鉴模式植物蛋白质提取方法的基础上, 建 氧化酶类和防御基因的表达(Chan and Tian, 2006; Tian 立了一整套适用于多种果实, 如甜樱桃( P r u n u s et al. , 2007)。为了进一步研究果实应答生物因子和非 a v i v u m ) 、桃( P r u n u s p e r s i c a ) 、苹果( Ma l u s 生物因子过程中参与表达的蛋白及其功能, 利用蛋白质 domestic a)、芒果(Mangi fera indi ca)和冬枣(Ziz ip hus 组学的研究方法来揭示果实抗性应答的机理是十分重要 j uj ub a) 的蛋白质组学研究方法, 包括蛋白质的抽提、 的手段。 蛋白质裂解液的优化、双向凝胶电泳以及凝胶染色 蛋白质组学技术包括蛋白质的高分辨率电泳分离、 方法等。 胶内酶解、质谱鉴定以及数据库搜索等。如今, 蛋白 质组学技术已经被广泛地应用于动物和微生物领域的研 1 材料与方法 究(A nt elmann et al ., 1997 ; Qin et al ., 2007), 在植物 生物学方面也有广泛的应用(Dominguez -Puigjaner et 1. 1 实验材料 al ., 1992 ; Chang et al ., 2000)。植物细胞中包含许多 桃(Prunus p ersi ca L. Bat sc h)采于北京市平谷的试验 次生代谢物质, 可能会干扰蛋白的提取、分离及纯化 果园, 甜樱桃(Prunus avivum L. ‘Hongdeng’) 采于中国 (Granier, 1988; Meyer et al. , 1988) 。而从果实组织 科学院植物研究所的试验果园, 苹果(Malus dom es ti ca 中提取蛋白质更加困难, 可能是由于果实中蛋白质含量 Bork h ‘Fuj i ’) 采于中国农业科学院林果所果园, 芒果 相对较低, 并且含有大量干扰性物质, 如色素、淀粉、 (Mangi f era indic a L