肺鳞癌与小细胞肺癌组织比较蛋白质组学研究.pdfVIP

VoI. 26 高 等 学 校 化 学 学报 No. 9 2 0 0 5 年9 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 1645 ~ 1649 肺鳞癌和小细胞肺癌组织比较蛋白质组学研究 罗国安，邓 斌，叶能胜，王义明 （清华大学生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室，北京100084 ） 摘要 通过16 例人肺鳞癌和小细胞肺癌组织中表达蛋白的二维电泳分离和质谱分析，经数据库检索鉴定了 53 个蛋白，其中24 个蛋白与肺癌发病机制相关，4 个蛋白在其它癌症中有报道. 表达呈现差异的蛋白点有 44 个，其中34 个在表达量上有差异，10 个蛋白在鳞癌和小细胞癌间表现为有和无的关系. 蛋白功能分析提 示人肺鳞癌与小细胞癌的蛋白质组表达存在差异，分析这些差异蛋白有利于肺癌分型及其生物标志物研究. 关键词 肺鳞癌；小细胞肺癌；蛋白质组学 中图分类号 @51 文献标识码 A 文章编号 0251-0790 （2005 ）09-1645-05 肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一，在我国其发病率和死亡率不断上升，但其发病机制 目前仍在积极探索之中 ［1］ . 蛋白质组学作为后基因组学时代的重要研究工具，在疾病病理 、衰老机 ［2 ］ ［3 ~ 6 ］ 理 等方面都有重要的应用. 在癌症研究中，蛋白质组学方法已经被广泛应用到肺癌研究中 ，已 ［7 ］ 建立了肺癌蛋白数据库 ，将有助于揭示其发病机制. 我们选择肺癌中鳞癌（Sguamous ceII Iung carci- nomas ，S@CLC ）和小细胞肺癌（SmaII ceII Iung carcinomas ，SCLC ）组织为研究对象进行比较蛋白质组学 研究，寻找可能的疾病发生和发展的分子标记；探索这些标志物在肺癌发病上的作用机理，从而为肺 癌的早期诊断、愈后、发现新药物和设计疾病控制方案等提供新的依据. ! 实验方法 !. ! 试剂、仪器及样品来源 固相pH 梯度干胶条（IPGs ，immobiIine pH gradient DryStrip ）、十二烷基磺酸钠（SDS ）、二硫苏糖醇 DTT ）、三羟甲基胺基甲烷（Tris ）、溴酚蓝、过硫酸胺（APS ）、甘氨酸、丙烯酰胺、IPG-缓冲液（pH = （ 3 ~ 10 ）、覆盖液、琼脂糖、尿素、标准蛋白、三氟乙酸（TFA ）均购自Amersham Pharmacia Biotech 公司； ! ，! - 甲叉双丙烯酰胺、考马斯亮蓝R-250 、 -氰基-4 -羟基肉桂酸、胰岛素、3-［（3-胆酰胺丙基）-二乙 ! 胺］-丙磺酸（CHAPS ）均购自Sigma 公司；碘乙酰胺购自ACROS 公司；胰蛋白酶和CompIeteTM （蛋白酶 抑制剂）购自Roche 公司，其余均为国产分析纯或色谱纯试剂. IPGphor 等电聚焦电泳仪、图像扫描仪 及ImageMaster 2D EIite 图像分析软件购自瑞典Amersham Pharmacia Biotech 公司，PROTEAN ! Xi CeII 垂直电泳仪、自动取点仪购自BIO-RAD 公司，基质辅助激光解吸/ 电离飞行时间质谱（MALDI-TOF- MS ）购自德国Bruker 公司. 肺癌组织手术切除后，其中一半送病理室作病理分型检测，另一半于液氮 中保存. 共收集到16 份肺癌组织样本，其中小细胞肺癌组织3 份，其余为肺鳞癌组织. !. # 组织蛋白的提取