第三章微生物育种.pptVIP

黄色短杆菌的代谢过程 ? 黄色短杆菌的代谢特点 天冬氨酸激酶（AK），是一个变构酶，并有两个活性中心，分别受Lys、Thr的协同反馈抑制 协同反馈抑制：该酶有多个活性中心，抑制物可以分别和某一个特定的活性中心结合，但是并不影响该酶的活性，只有当该酶的所有的活性中心都被抑制物结合后，其活性才受到抑制。 两个分支点的优先合成机制 ： 优先合成Hos，然后再优先合成Met 当Met过量时 阻遏琥珀酰高丝氨酸合成酶，使代谢流向合成Thr的方向进行 当Thr过量时 反馈抑制高丝氨酸脱氢酶，使代谢流向Lys的合成上。（Met＞Thr＞Lys） 育种途径 1.切断或减弱代谢支路 切断或减弱合成Met 、Thr的分支途径——选育营养缺陷型或渗漏突变株 渗漏缺陷型:遗传障碍不完全的突变型，其中某一种酶的活性下降而不是完全丧失，所以这种缺陷型能少量合成某种代谢终产物，能在基本培养基上进行少量的生长。 由于渗漏缺陷型不合成过量的终产物，所以不会造成反馈抑制而影响中间代谢产物的积累。 A、需要选用HomL（L，leakage） 其意义在于实现优先合成的转换：可引起一种终产物的过量生成。 高比活性的高丝氨酸脱氢酶（HD）使Met、 Thr优先合成。若往培养基里添加过量的Met，将HD的活性控制在原来活性的1/3，在野生株中也能积累5g/L Lys，进一步通过突变将HD比活性降低到原来活性的1/3，可积累20g/L Lys。 在这样低的比活性下，不添加Thr和Met，野生菌株也能正常生长。 但如果单独过量添加一种Thr或Met，反而由于过剩的Thr或Met抑制或阻遏本来已经活力很低的HD使Thr或Met合成不足而抑制生长。 结果：由于HD活性下降但不完全丧失，使代谢流发生变化，使原来优先合成Hos方向转向合成Lys方向。而Thr和Met少量合成，生成的Thr的量不足以与Lys共同对AK酶起协同反馈抑制，就使Lys得以积累。 B、需要选用Hom-，其意义在于： 解除了Hom的优先合成机制，阻断了代谢向Met、Thr的方向进行，节省了原料，可以使Asp-β-半醛这个中间代谢产物全部转入Lys的生物合成上。 在培养基中限量的供给Met 、Thr（或者Hom），对于AK酶活性的调节有着重要意义。因为AK酶是一个协同反馈抑制的变构酶，限制了其中某一个抑制物（Thr），则Lys的浓度再高，也不会影响到AK酶的活性，那么，代谢一直向着赖氨酸合成的方向进行，使得产物的合成畅通无阻。 　　　双重营养缺陷型突变株（Met- + Thr-）,其本质和Hom- 相同。 　　　优点：遗传性质稳定，回复突变的几率少。 人工控制黄色短杆菌的代谢过程生产赖氨酸 　　 从理论上讲，选育Hom- 进行赖氨酸发酵，如果在其培养基中限量供给Thr，则AK酶的活性不会受到Lys的反馈抑制，实际上Lys对AK酶的活性存在一定的抑制作用。因此，对于黄色短杆菌的Lys发酵，仅仅选育Hom- 是不够的。为了高效率的转化Lys，需要解决这一问题： 　　 使该酶（AK）脱敏（就是该酶具有抗反馈抑制或阻遏的能力），如何使其脱敏呢？ 选育结构类似物抗性突变株（X r） S-L-半胱氨酸抗性突变株 AEC r （效果最佳，应用最广） γ-甲基赖氨酸抗性突变株 ML r L-赖氨酸氧肟酸盐抗性突变株 LysHxr 苏氨酸氧肟酸盐抗性突变株 ThrHxr L- Lys:CH2(NH2) -CH2-CH2-CH2-CH (NH2)COOH AEC: CH2(NH2) -CH2-S-CH2-CH (NH2)COOH 　　结构类似物AEC的作用机制：起假反馈抑制作用 　　 　　AEC 与L- Lys结构相似，被天冬氨酸激酶所误认，与Thr一起在天冬氨酸激酶的变构部位上结合，协同抑制酶活。 　　抗结构类似物突变株的实质：天冬氨酸激酶的结构基因发生突变。 原生质体融合的优点 重组频率较高。如放线菌原生质体融合频率达 10-2~10-1，小型丝状真菌达10-3~10-2，细菌和酵母也达10-6~10-5。 受接合型或致育型的限制小。将原生质体进行融合与细胞表面结构无关，二亲株中任何一株都可起受体与供体的作用，这有利于不同种属间微生物的杂交。 遗传物质的传递更为完善。原生质体融合是二亲株的细胞质和细胞核进行类似合二为一的过程，既有质配又有核配，原核微生物可以有2个或多个完整的基因组携带到一起的机会，放线菌中还能形成短暂的或拟双倍体的融合物，在真菌中能形成暂时的或稳定的双倍体。 重组体种类多 有助于外源基因