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GM．csF-d‘融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗痛作用 325
GM．CSF．tk融合基因转导人神经母细胞瘤株
SH．SY5Y的抗瘤作用
王新娟张骏张蕾许进力王荚健蔺新力
死亡率中高居第一位。外科手术对早期实体瘤的患者较为有效，对晚期及有微小残余病变的
gene)治疗在基
患者则达不到治疗目的。自杀基因(suicidegene)联合细胞因子基因(cytokine
因治疗领域中有其优越之处，而备受关注。
可稳定传代的阳性细胞集落。再进一步检测外源基因的存在和活性细胞因子的分泌，探讨该
融合基因体系的体外抗瘤效应，为今后利用此融台基因体系治疗恶性肿瘤迈出第一步。
材料与方法
kb的CMV／hGM一(靳一
kb，为含一长3．45
龙教授惠赠。pLxpsp-hGM-CSF-Hytk，全长8．45
长6．2kb。
7-ATGTG—
2．RT-PCR引物和内参照(3．磷酸甘油醛脱氢酶)引物hGM—CSF上游引物：5
GCllGCAGAGCCTGCTGc3
内参照上游引物：5’．Am。(℃Ga：TGGAGAAAa卫G．3
GAAl℃掰AGll、()CTGl’I’G-3’。
(4，5-dimethyhhiaz01．2．y1)．2，5．diphenyltetrazolium
产品。
长期PA317的细胞，用PBS清洗2次。在一无菌小管中将97脚无血清培养液和3～6plFn
本课题受国家自然科学基金项目资助
作者单位：100083北京医科大学生化与分子生物学系(王新娟张骏张蕾许进力王笑健)；美国俄克
拉荷马医学基金会，OK73104(蔺新力)
中国癌症研究进展o
h。加入500
置15rain。逐滴加入此混合液至细胞培养皿中，并于37℃、5％002培养24～72
d换液1次，约在14d左右可见到抗性细胞集落，即重组病毒产生
／．tg／ml潮霉裹B筛选。2～3
retroviral
细胞(reeombinant
‘
毒，用NⅡB13细胞测定病毒滴度。 ，
5．重组逆转录病毒转孚SY5Y细胞度，日性细胞集落的产生于24孔板中每孔接种对数
h病毒上清，添加p01ybnme
／．tg／ml，第12天全部死亡的浓度为最佳潮霉素B筛选浓度。取24
h。此后2～3d换液一次，内含筛选浓度的潮霉索Bo在12--14
至4tLg／ml，与细胞共孵育48
d可获得抗性细胞集落。
mRNA共5组进行25
加RNA的空白对照和SY5Y-Hytk
37℃1 rain；
h，煮沸5mill灭活逆转录酶活性。PCR反应条件：预变性：95℃5rain；60℃1
rain。
7。MTT法检测依赖GM-CSF生长的TF-1细胞的存活能力将对数生长期的TF．1细胞
100一，令其终浓度为0～
孔板每孔加入100正细胞悬液，以3孔为一组，加不
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