传染性法氏囊病病毒多表位模拟肽串联基因的表达和免疫原性分析.pdfVIP

禽娄传染病 传染性法氏囊病病毒多表位模拟肽串联基因的表达与 免疫原性分析 王永山1，。范红蛄2，张晓民’，李银’。肖炔娟1 (’南京军区军事医学研究所南京军区庆藕预防控制中心南京2Io002) (2南京农业大学动物医学院南京2I0095) (’江苏省农业科擘院暮匝研究所南京210014) 摘要用5林传采性法氏囊病病毒(mDv)单克隆抗体(mAb)从噬茵体随机肽库中得到了5十含有不 同IBDv抗原表住的模拟肤序列．在此基础上，将5个抗原表住用GGGs四肢连接构建多表住基因5epis． 将谊基固合成、克隆后．构建原橱表达质粗pEl：5epis，在大肠杆菌中表速重组多表值蛋白r5EPIs，经 进行免疫印连时比分析，结果表明，f5EPIs具有IBDv特异性和免疫反应性．将r5EPIs经皮下注射免疫兔， 加免疫佐刺经肌肉注射免疫璃，50¨∥只，次，免疫2农后，血清抗体效价可达到1：12800，用200个ELDdBDV 4，15)’证明r5EPIs 超强毒株Gx8，99攻击实验鸡，r5EPIs免疫组全部存活．而对照组的死亡率为93．3％(1 可诱导机体产生抗mDv感粢的保护性免疫应答．预示构建的5cpis可作为lBD多表位疲苗研究的候选基 因． 关键词传染性法氏盘病痛毒；抗原表位；表达；免疫原性 传染性法氏囊病(Infectio惜BursalDi∞∞e，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(埘钰如∞ 口“m口，D捃P∞P陆w。mDv)引起的以侵害雏鸡淋巴组织，特别是中枢免疫器官——祛氏囊 为主要特征的传染病，是危害养鸡业的重要传染病之一IIJ。免疫接种是防控IBD的有效措施， 但变异株和超强毒株的出现使该病的防制难度增大，目前虽然研制了多种商品化的弱毒疫苗 和灭活疫苗，但其安全性和制造工艺尚有不尽人意之处，如为抵抗超强毒的攻击，使用中强 毒力的毒株研制活疫苗，给IBD的防控带来极大的隐患，灭活疫苗存在着抗原制备的困难， 因此，探索基因工程疫苗成为IBD防控研究的重要内容。 对IBDv的抗原表位分析已有进展。目前。在VP2上至少已经发现了3个构象依赖性 中和抗原表位，在vP3上也发现了1个线性中和抗原表位印I。前期，本课题组运用5株IBDV 单克隆抗体(mAb)从噬菌体展示随机12肽库中筛选含有IBDv抗原表位的短肽，经测序 分析，得到了5个含有不同mDv抗原表位的模拟肽序列”J。 本研究旨在IBDv抗原表位分析的基础上，构建由5个抗原表位模拟肽串联组成的多表 位抗原基因，利用高效原核表达系统制备重组多表位蛋白。通过免疫实验确定其免疫原性和 免疫保护效力，为基于表位的IBD多表位疫苗研究奠定基础。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1抗体 5株mDv单克隆抗体：删Fl和m师7，抗体亚类均为IgGl，由河南省农业科学院生 物技术研究所惠赠；B34。抗体亚类为IgGl，由中国兽药监察所陈光华研究员惠赠【，J：2Bl 隆抗体对应不同的病毒抗原表位．病毒中和试验证明B34和2G8对IBDV具有中和作用p“。 IBDv免疫血清系用mDv分离毒株ZB和TA3制各的纯化病毒抗原免疫兔获得(以下简称： 多克隆抗体)，由本课题组制备嘲．mDv免疫血清与单克隆抗体腹水经心眦4)2S04盐析和 DEAB纤维素纯化后使用。 1．1．2肤库，质粒和菌种 Kn)购自NEw 噬菌体展示12肽库试剂盒(Ph．D．．1I“PhageDisplayPepndeLibr8ry 基盎项目：国家自然科学基盎资助项目；江苏省自然科学基盎资助项目(BK2003011) 作者简舟：王永山l1963一)．男．山东诸城人，研究员，博士，研究方向为动物病毒学与分子生物学． 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 ENGLJ～ND Novagen公司．大肠杆菌JMl09和BL2l①E3)为本课题组保存【”． 1．1．3试剂和仪器 DNA聚合酶I(Kle∞w片段)、dNTP’T4DNA连接酶、限制性内切酶圮I和脚”dIⅡ、 连宝生物(TaKaRa)公司l