强光照处理菠菜叶片产生交联聚合物中D1蛋白部分发生磷酸化.pdfVIP

强光照处理菠菜叶片产生的交联聚合物中D1 蛋白部 分发生磷酸化1 魏慧敏 郭军伟 张爽 黄博 刘映秋 杜林方 （四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室, 成都，610064.） E-mail: dulinfang@ 摘要 利用D1 蛋白特异性抗体，在强光(800-2500 µmol photons·m-2·s-1)照处理3 h菠菜叶片 的类囊体膜中检测到 4 种D1 蛋白聚合物, 它们的相对含量与处理时光照强度相关. 进一步 分析表明：70 kD聚合物为D1 蛋白与CP43 交联产物, 65 kD和60 kD聚合物是D1 蛋白与D2 蛋白交联产物, 41 kD 聚合物是D1 蛋白与细胞色素b559 α亚基交联物. 1000 µmol -2 -1 photons·m ·s 光照处理生成的D1/Cyt. b559聚合物最多, 光强增加时含量下降. 磷酸化苏氨酸 抗体Western blot分析结果显示: D1/Cyt. b559和D1/CP43 聚合物中存在磷酸化蛋白; 外加磷酸 酯酶处理后, 磷酸化的D1/Cyt. b559和D1/CP43 聚合物减少. 上述结果表明, 强光照处理叶片 引起D1 蛋白与其它PS Ⅱ核心蛋白交联, 所生成的聚合物中部分D1 蛋白以磷酸化形式存在. 关键词 D1蛋白 蛋白磷酸化 蛋白聚合物 叶片 光抑制 CP43 细胞色素b559 1. 引 言 光系统Ⅱ(PSⅡ)是催化原初光化学反应和裂解水放氧的色素蛋白复合物. 由D1和D2蛋白组 成的PSⅡ反应中心结合PSⅡ上所有的氧化还原电子传递体[1].过分光照会导致植物光合机构 的损伤和叶绿体电子传递受阻，发生光抑制，并引起D1蛋白的氧化损伤[2]. 光抑制可分为两 类: 由单线氧分子引起的受体侧光抑制，由内源性阳离子自由基（产生的P680+ + 和TyrZ ）引 起的供体侧光抑制[3] [4] . 光损伤的D1蛋白降解后可以被新合成的D1蛋白取代 . D1 蛋白的周转代谢迅速且依赖于光照[5]. 高强度光照下发生磷酸化是D1 蛋白的特点之 [6, 7] 一 . 这种可逆的磷酸化可以使损伤的D1 蛋白避免水解，而起到调控D1 蛋白周转代谢的 作用[8]，因为磷酸化的D1蛋白只有在去磷酸化后才能被降解[9, 10]. PSⅡ反应中心进行光抑制 处理时, D1蛋白要与Cyt b 的α亚基发生交联, 产生D1/Cyt. b 聚合交联物[11, 12]. 强光照 559 559 射处理PSⅡ颗粒[13-15] [14] 、类囊体和叶绿体 也会产生D1/D2 和D1/CP43 聚合物. 但是D1 蛋白与 邻近的PSⅡ亚基聚合(交联)的现象只见于体外试验中[11-16]. 迄今为止, 尚无实验观测到活 体中D1 蛋白交联聚合的现象，并且D1 蛋白周转代谢中发生聚合和磷酸化之间的关系也不清 楚. 本文在强光处理的菠菜叶片中检测到 4 种D1 蛋白的聚合物, 并证明存在磷酸化的 D1/Cyt. b 和D1/CP43 聚合交联物. 559 2. 材料与方法 1本课题得到国家自然科学基金 (批准号教育部博士点基金 (批准号 20020610094)的资助。