氧化低密度脂蛋白对骨髓间充质干细胞生物学特性与内皮分化的影响及其潜在机制.pdfVIP

第十七届伞国小儿心血管疾病学术会议 大会交流 采用SPSSl3．0统计学软件处理数据，计量资料以均数士标准羞(，i±J夕表示。不同超声显 像模式对VSD显示的阳性率比较、同种显像模式对不同组VSD显像阳性率间的比较采用行 ×列表的f检验，以P0．05为差异有显著性。 结果同种显像技术对不同组VSD显像阳性率间的差异具有统计学意义，P值均小于 0．00。三种超声显像模式对C组VSD的显示阳性率均最高，对A组VSD的显示阳性率最 低。在三种显像模式中，E．flow对三组VSD显像的阳性率均显著高于其他显像模式，其差 异具有统计学意义(氏0．01)。 结论E．flow显像模式可在产前准确诊断各种类型和大小的VSD，尤其对于目前容易漏 诊和误诊的中、小型VSD和流出道及干下型VSD更易显示，因此提高了胎儿VSD产前诊 断的敏感性和特异性，是一种有效的显示模式，值得临床推广应用。 138．氧化低密度脂蛋白对骨髓间充质千细胞生物学特性和内皮分化的影响及其 潜在机制 吕铁伟1朱静2孙慧超1冯川1陈沅1刘振国3田杰1 1．重庆医科大学儿童医院心血管内科，400014：2．儿童发育疾病研究省部共建教育部重点 实验室，400014；3．俄亥俄州立大学医学中心心肺研究所 目的本研究以骨髓间充质干细胞MAPCs为研究对象，通过体外培养过程中氧化低密度 脂蛋白ox．LDL的干预，观察其对MAPCs增殖、干细胞表面标志Oct-4表达和内皮分化的影响， 并从氧化应激水平及细胞信号传导通路方面探讨OX．LDL对MAPCs生物学行为影响的机制。 组和空白对照组。采用电子顺磁共振技术检测各组中氧化应激产物ROS产量，在不同培养时 间点收集细胞计数并绘制生长曲线；分子生物学技术检测不同实验组干细胞特异表面标记 Oct-4蛋白表达量差异、不同组内皮方向分化时不同时间点内皮表面标记vucrF、Flk．1和CD31 表达情况；检测其内皮分化的效率及分化为血管样结构的形成情况，最后检测不同组别细胞 结果MAPCs细胞在C02孵箱中以低氧及低密度培养，细胞生长状态良好，增殖速度快， 每48h且P可传代，在加入VEGF的分化培养基中能向内皮细胞方向分化，在培养的第一周出 222 第十七届全国小儿心血管疾病学术会议 大会交流 现内皮表面标记vWF、Flk．1和CD31基因表达，第二周出现蛋白的表达：在细胞增殖的过程 中，加入不同浓度的OX．LDL，细胞增殖受到影响，随浓度增加细胞增殖受抑制明显，其中 OX．LDL浓度为5ug／mL时细胞数量的减少已有统计学意义，浓度进一步增加时，细胞出现凋 亡，数量明显减少，抗凋亡蛋I刍Bcl．2表达减弱，而培养基中加入IlLDL则对细胞增殖没有影 响；当培养基用抗氧化剂NAC预处理后再加入OX．LDL干预，OX．LDL对细胞增殖的抑制作用 OX—LDL对MAPCs增殖的抑制作用；同时 明显减弱，其中NAC预处理几乎完全逆转TSug／mL 化的过程中， MAPCs在分化一周后可以检测到内皮细胞表面标记vWF、Flk．1和CD31的表 达，分化第2周时表达增强，并且检测到血管样结构的形成，但加入OX．LDL干预后MAPCs 内皮分化明显减弱，第2周没有检测到血管样结构的形成，但经过NAC预处理的MAPCs向内 皮细胞分化的过程中再加入OX．LDL干预，在第一周内皮细胞表面标记表达接近正常，第二 周血管样结构重新出现；流式细胞技术检测正常条件下MAPCs在分化第二周vWF阳性表达 性表达率则恢复到45％；从氧化应激活性产物ROS和细胞信号传导通路蛋[刍Akt两方面对分 化的机制进行检测，结果发现正常培养基和加入nLDL后的培养基经过EPR技术检澳IJROS的 产量很低，而经过OX．LDL干预的培养基ROS的产量明显增加，最有意义的是NAC预处理后 再经过OX．LDL干预的培养基ROS产量明显降低，而单纯NAC对ROS生成没有影响，该结果 与OX．LDL对MAPCs的增殖和内皮分化的影响成正相关：而对细胞信号传导蛋白Akt检测发 现，OX．LDL干预后细胞组与正常培养组相比，磷酸化Akt表达明显降低，而NAC预处理后在 加入OX．L