小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)酶联免疫分析试剂盒使用.pdfVIP

小鼠脑源性神经营养因子（BDNF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：15.6 pg/ml -1000 pg/ml 最低检测限：3.9pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠BDNF，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中BDNF 含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任 何影响。 概述 脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）是1982 年德国神经生物学 家从猪脑中分离出来的小分子蛋白质，因猪、大鼠、小鼠和人类的BDNF具有完全相同的 氨基酸编码序列，且与神经生长因子（nerve growth factor，NGF）序列具有惊人的相似性, 故被归属为神经生长因子家族成员。BNDF 是由120 个氨基酸组成的一种碱性蛋白，是神经 营养因子家族成员之一，是由神经元的靶细胞分泌，逆向营养神经元，BNDF 对神经细胞的 生长发育及保护修复有重要作用,其生物学效应主要由二种类型的跨膜糖蛋白介导，一种是 高亲和力受体TrKB，另一种是低亲合力神经营养素受体（LNGFR），其中TrKB是信号转 导所必需的。TrKB的细胞外配体结合区与BNDF结合后可发生自磷酸化，继而发生一系列 底物磷酸化反应，实现从细胞膜到细胞核的信息传递而引起细胞应答效应,TrKB主要表达 在脑中。目前BDNF 被认为是抗凋亡剂、抗氧化剂和钙通道阻滞剂。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗BDNF 抗体的微孔中依次加入标本或 标准品、生物素化的抗BDNF抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅 和样品中的BDNF呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品 浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板（Assay plate ）：一块（96 孔）。 2.标准品（Standard）：2 瓶（冻干品）。 3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。 4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。 5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。 6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。 9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof 管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6.蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 -8° C1000 x g离心15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将标本放 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准 曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000 p