微柱液相色谱一电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点.pdfVIP

维普资讯 2007年 7月 色 谱 Vo1．25NO．4 July2007 ChineseJournalofChromatography 453～456 微柱液相色谱一电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点 王 晖 ， 段继诚 一， 袁辉明1,2， 张丽华 ， 张维冰 ， 张玉奎 (1．中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究分析中心，辽宁 大连 116023； 2．中国科学院研究生院，北京 100039) 摘要 ：基于碱性磷酸酶的去磷酸化作用 ，发展了一种可改善多磷酸化肽 电喷雾质谱检测效果的技术 。将 卢一酪蛋 白 酶解产物用TiO，柱富集后，用碱性磷酸酶进行处理，并经微柱液相色谱分离后采用串联质谱进行鉴定。通过谱图 中存在相对分子质量与根据氨基酸序列预计的单磷酸化肽相差 80的色谱峰，可以证实样品中含有单磷酸化肽。 此外，经碱性磷酸酶处理后的样品的色谱峰数 目的增加，说明样品中可能存在多磷酸化肽段。通过控制去磷酸化 反应的程度 ，使 四磷酸化肽的部分磷酸基 团被去除，从而可以推断其中3个磷酸化位点可能处于氨基酸残基序列 的第 17、18和 19位。 关键词：微柱液相色谱；电喷雾串联质谱；多磷酸化肽；磷酸化位点；碱性磷酸酶 中图分类号 ：0658 文献标识码 ：A 文章编号：1000—8713(2007)04—0453—04 栏 目类别 ：研究快报 Detection ofM ulti-Ph0 ph0peptide SitesUsingM icrocolumn High PerformanceLiquidChromatography- ElectrosprayIonization Tandem MassSpectrometry WANG Hui一，DUAN Jicheng一，YUAN Huiming一，ZHANG Lihua ， ZHANG Weibing ，ZHANG Yukui (』．NationalChromatographicR．＆A．Center，DalianInstituteofChemicalPhysics，theChineseAcadme yof Scineces，Dalian116023，China；2．GraduateUniversityof ChineseAcademyofSciences，Beijing100039，China) Abstract： A novel detection method for the analysis of multi—phOsphOpeptides using microcolumn high performna ce liquid chromatography—electrospray ionization tandem mass spectrometry (~HPLC—ESI—MS／MS)wasproposedbythedephosphorylationtreatmentofalka- linephosphatase(AP)．AftertheselectiveenrichmentbyamicrocolumnpackedwithTiO2， phosphopeptidesfrom the tryptic digestsof 一casein were dephosphorylated by AP．Through theremovalofphosphategroups，thedetection ofmulti—phOsphOpeptidesaccordingtothenon— phosphorylatedoneswasachieved by ESI—MS／MS．By comparing the chromatogramsbefore na d aftertheAPtreatment，mono—