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2009; 35 (2) 蚕 业 科 学 CA NY E KEXUE 379
桑天牛成虫肠道细菌基因组 D NA 的提取及 PCR反应体系优化
袁秀洁 李会平 黄大庄 黄秋娴 苏筱雨 侯晓杰
(河北农业大学 ,河北保定 07 1000)
摘 要 为了建立一套适用于桑天牛肠道细菌多样性研究的 PCR 反应体系和程序 ,采用改良的十六烷基三乙基溴
( ) ( 5 )
化铵 CTAB 法提取桑天牛成虫肠道细菌基因组 DNA ,通过 L 4 正交组合试验和单因素梯度试验对 M gCl 、
16 2
dN TP、随机引物 、Taq DNA 聚合酶 、模板 DNA 的浓度和退火温度 、循环次数等影响 PCR 扩增的重要因素进行优化 。
μ
试验结果表明 ,采用改良的 CTAB 方法提取的桑天牛成虫肠道细菌 DNA 质量较高 ,适宜于 PCR 扩增分析 。25 L
μ
PCR 反应体系及反应程序中各因素优化组合为 : 10 ×Buffer 25 L ,M gCl 2 0 mmol/L , dN TP 02 mmol/L ,随机引物
2
μ
048 mo l/L , Taq DNA 聚合酶 075 U ,模板 DNA 75 ng;退火温度 60 ℃,循环次数 30次 。
关键词 桑天牛 ; 肠道细菌基因组 DNA ; PCR 反应体系 ; 正交组合 ; 单因素
中图分类号 S888. 72 + 9; Q939. 12 1; Q503 文献标识码 B 文章编号 0257 - 4799 (2009) 02 - 0379 - 05
Genom ic D NA Extraction and O ptim iza tion of PCR Reaction
Sy stem of A p rion a germ a ri In testina l Bacter ia
YUAN X iuJ ie L I Hu iP ing HUAN G D aZhuang HUAN G Q iuX ian
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