双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系建立及其生物学特性鉴定.pdfVIP

双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系的建立及其生物学特性鉴定 刁睿鑫张 勇胡俊杰常卫华 林涛张志强徐燕霞胡少辉张连梅赵娜 甘肃农业大学动物医学院，兰州730070 摘 要：本研究旨在建立双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系。采集双峰驼胎儿耳缘组织，用植块培养法和消化分离法对其进 行原代培养，差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化，并对培养细胞的形态、细胞活力、生长动力学、免疫组织化 学、核型、绿色荧光蛋白基因质粒(GFP)转染表达以及微生物污染等生物学特性进行了分析。结果表明，原代和传代细胞 形态正常，群体倍增时间(PDT)为47.2h，细胞生长较快；不同代数的染色体众数为2n=74;免疫组织化学鉴定波形蛋白 抗体呈阳性，角蛋白抗体呈阴性;外源质粒能在该细胞内整合和正确表达；微生物污染检测呈阴性。因此该研究已成功建立 了双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系，在细胞水平上保存了双峰驼这一国家重要种质资源，为基因组文库和体细胞克隆等研 究提供了理想的生物材料。 关键词：双峰驼；耳缘组织；成纤维细胞系；生物学特性 EstablishmentandcharacteristicofaBactriancamelfetalear marginalfibroblastcellline DIAORuixin CHANG WeihuaLINTao XUYanxia； HU ZHANGYongHUJunjie ZHANGZhiqiang Shaohui；ZHANGLianmei；ZHAONa CollegeofVeterinaryMedicine,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China Abstract:TheexperimentwasconductedtoestablishaBactriancamelfetalearmarginalfibroblastcellline.TheBactriancamel fetalearmarginaltissuewasculturedwithexplantsortrypsinization,whichwasthensubculturedandpurifiedthroughtrypsin digestionanddifferentialanchoringvelocity.Analysisoncellmorphology,cellviability,growthdynamics,immunocytochemistry, karyotype,transfectionandexpressionofgreenfluorescentproteinmarkerplasmid(GFP),microbialcontaminationwerecarriedout. Theresultsshowedthatthepopulationdoublingtime(PDT)ofthecellswas47.2h;themajorityofchromosomenumberwas74;the immunocytochemistrywaspositiveforvimentinandnegativeforcytokeratin;theexogenousplasmidcouldintegrateandexpressin thecells;detectionformicrobialcontaminationwasnegative.Asaconsequence,wehadsucceededinestablishingthefibroblastcell lineofBactriancameloncelllevelwhichisasignificantnationalgermplasmresource,providinganidealexperimentalmaterialfor futurestudiesofagenebankandsomaticcellcloning,etc. Keywords:Bactriancamel;Earmarginaltissue;Fibroblastcellline;Biologicalcharacteristics l离心后加j l时期细胞生长柞 }rentpe