门静脉血基因突变预测大肠癌隐匿性肝转移.pdfVIP

n静脒血基圆突变囊测大肠癌患匿性肝转移 门静脉血基因突变预测大肠癌隐匿性肝转移 陈光陆钱志强詹利永蒋红铜陈自强 大肠癌根治性手术后。仍有30％～40％患者肝转移，而且大多为手术后异时相肝转移，其 者门静脉血突变基因，临床随访其手术后2年内肝转移率，以探讨门静脉血突变基因检测与肝 转移的关系。 材料与方法 1，取材取根治手术标本癌组织ig，送检基因SSCP分析，傲原发癌基因突变类型PCR 扩增鉴定。手术中结扎相应系膜前，抽取门静脉血1m1，抗凝管送检，以已经检测到的癌组织 K-ras、p53突变类型确定的区段位点进行PCR扩增，做等位基因检测。手术当天清晨，抽外周 静脉血lml送检对照。 2．基因突变分析采用旋转离心柱系统方法，提取样品中的DNA。K-ras基因扩增反应 bp为突变型，114 后。用BstnI、Hph[两种限制性内切酶做酶切反应。BsmI酶切反应产生143 bp为突变型，157bp为正常型。EB染色，紫外灯下观 bp为正常型。HphI酶切反应产生114 测结果。 111l 单链构型多态性分析检测p53基因，对p53基因第5．6、7、8外显子分别进行扩增，取2 变性剂行变性反应，反应条件为95℃5min，反应后立即放在冰上，聚丙烯酰胺变性电泳，银染 色后5％醋酸终止反应，荧光灯下观测结果。 3．统计学分析采用，检测。 结 果 本组门静脉血突变基因阳性与大肠癌临床分期、病理及肝转移的关系见表l，2。 C、D期患者比较，阳性检测率差 分化程度无关；与大肠癌临床分期，即DukesA、B期及Dukes 异有显著性(P均0．05)。 随访2年。发现肝转移8僦，其中l例为手术中已发现有肝转移灶，另7例分别在术后3～ 12个月髓访发现肝转移灶。 作者单位：314000浙江省嘉兴市第一医嚏 中国癌症研究进展。 裹1 30饲大肠癌突变基因检测结果 注：()内为％；K-res为12，13密码子突变．p53+为第4,6区段宪变 裹2 30倒门静脉血突变基因阳性与大肠癌临床分期、扃理殛肝转移的美系 ．随访证实肝转移8例中，门静脉血突变基因检测均阳性，其中2例K．m、p53同步阳性． 门静脉血突变基因检测阴性者，随访2年未发现肝转移。经统计学分析，大肠癌手术后肝转移 与仃静脉血突变基因阳性有非常显著关系(PO．005)。 且该4例同时检测到门静脉血有相应突变基因阳性。门静脉血检出率明显高于外周静脉血。 随访该4例患者全部发生异时相肝转移，证明外周静脉血与门静脉血同时阳性者。对预测隐匿 性肝转移价值更高。 讨 论 灶，具有检出率高的优势。 本组结果显示，门静脉血突变基因阳性率与大肠癌临床分期呈明显相关。在DukesA、B 门静脉血基因突变预蔫大肠癌隐匿性肝转移 273 的机率也明显增加，因此检测门静脉血突变基因，也可以增加大肠癌临床分期的准确性。大肠 癌合并肝转移的患者中，门静脉血突变基因检测阳性率分别高达50％和75％，术后随访2年， 肝转移，其间差异有极显著性(P0，005)。表明在门静脉血已检测到有突变基因存在的患 者，手术后有可能出现肝转移，甚至已存在肝微转移灶，而临床一般检测方法手术时还无法发 现，应在手术后严密随访，或采取预防性治疗。 对照组外周静脉血检测到突变基因阳性者共4例(其中2例为K．r∞、p53同步阳性)，随 访该4例患者均发生异时相肝转移。说明外周静脉血与门静脉血同时阳性者，对预测大肠癌 手术后肝转移价值更高，值得重视。 大肠癌肝