微柱液相色谱电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点.pdfVIP

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2015-07-27 发布于安徽
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微柱液相色谱电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点.pdf

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!# 年# 月色谱 %#’ !$ (’ % !#$ !# !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 %$ ’ %$( 微柱液相色谱! 电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点 - ，! - ，! - ，! - - - 王+ 晖，+ 段继诚，+ 袁辉明，+ 张丽华，+ 张维冰，+ 张玉奎（-’ 中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心，辽宁大连 --(! ； ! ’ 中国科学院研究生院，北京 -* ）摘要：基于碱性磷酸酶的去磷酸化作用，发展了一种可改善多磷酸化肽电喷雾质谱检测效果的技术。将 * 酪蛋白 ! 酶解产物用 5-! 柱富集后，用碱性磷酸酶进行处理，并经微柱液相色谱分离后采用串联质谱进行鉴定。通过谱图中存在相对分子质量与根据氨基酸序列预计的单磷酸化肽相差 . 的色谱峰，可以证实样品中含有单磷酸化肽。此外，经碱性磷酸酶处理后的样品的色谱峰数目的增加，说明样品中可能存在多磷酸化肽段。通过控制去磷酸化反应的程度，使四磷酸化肽的部分磷酸基团被去除，从而可以推断其中个磷酸化位点可能处于氨基酸残基序列的第 -# 、-. 和 -* 位。关键词：微柱液相色谱；电喷雾串联质谱；多磷酸化肽；磷酸化位点；碱性磷酸酶中图分类号： ($.+ + 文献标识码：?+ + 文章编号：-*.# - （!# ）% *%$*%+ + 栏目类别：研究快报 #$#%$’( ’) *+,$!-.’/0.’0#0$1# 2$#/ 3/(4 *%5’%’,+6( 74. -#5)’568(%# 9:+1 ;.5’68$’4580. ! =,#%$5’/058 ’(?8$’( @8(1#6 *8// 20#%$5’6#$5 ?(@ =-- ，! ，AB?( !-3.601 - ，! ，;B?( =-+-01 - ，! ，C=?(@ D-., - ， C=?(@ 6-E-01 - ，C=?(@ ;F-- （!! #$%’#( )*+, #$-+#. *%/ 0 ! 1 2 ! )3’ $3+ ，4 #(%#’ 5’6 $%$7 $3 8 )*3,%/#( 9 *:6%/6 ，$*3 )*%’363 2 /#;3,: 8 /%3’/36 ，4 #(%#’ !!#$% ，)*%’# ；% ! =+#;7#$3 ’%?3+6%$: 8 )*%’363 2 /#;3,: 8 /%3’/36 ，@ 3%A %’- !$$$’ ，)*%’# ） AB/$58%$ ：? 0G6# 26H63H-0 +6H.2 IJ H.6 ,0,#$K-K I +#H-*4.K4.464H-26K K-01 +-3J3#+0 .-1. 46JIJ+,036 #-L-2 3.J+,H1J,4.$* 6#63HJK4J,$ -0-7,H-0 H,026+ +,KK K463HJ+6HJ$ （=MD9* )NO* PNQ PN ）/,K 4J4K62 E$ H.6 2