苯丙氨酸对映体的高效清相色谱法分离.pdfVIP

LC．122 苯丙氨酸对映体的高效液相色谱法分离 徐秀珠施介华 王继锋 许伟明 杭州310027) (浙江大学分析测试中心 (浙江省丽水市环境监理站丽水323000) 1前言 对映异构体分子在生物体内的代谢、分布和药理作用均有所不同。为了提高药物括性， 减少副作用以及进行药物生产和质量控制，对映体的分离在生化医学和非对称合成中是一 个迫切需要解决的课题”’”。对于离子性对映体的分离，离子对色谱具有独特的优越性， 但有关采用离子对色谱法分离手性对映体的研究报道不多”’”。本文首先将D，L．苯丙氨 酸衍生成酰胺对映体，衍生产物再经红外光谱测试，然后用奎宁作为手性离子对试剂，以 常规硅胶柱成功地分离了苯丙氨酸光学异构体，并且利用二极管阵列检测器进行了定性分 析。 2实验部分 2．1仪器和试剂 红外变换仪．D，L．芦．苯丙氨酸、L．苯丙氨酸、奎宁为生化试剂；其余试剂均为分析纯。 2．2色谱分离条件 色谱柱为ZorbaxSIL，25cm×4．6蛐i．d；流动相为二氯甲烷与正戊醇，内含奎宁和 冰醋酸，流速为1．8m【／m．m，柱温为常温，二极管阵列检测器波长范围为190~350m。 3结果和讨论 3．1定性分析 苯丙氨酸衍生产物色谱分离图见图l，其中图l咀为L苯丙氨酸衍生物谱图，图l-b 为D，L．口．苯丙氮酸衍生物谱图。由图l可见，L．苯丙氨酸衍生物诺图中的峰2与D，b 卢一苯丙氨酸衍生物谱图中的峰2保留时间十分吻合，而D，k卢-苯丙氨酸衍生物谱图中 的峰l在L苯丙氨酸衍生物谱图中没有被检测到，由此可以初步确定峰2即为L．苯丙氨 酸衍生物，而图1-b中的峰1及峰2即为D，L．鼻一苯丙氨酸对映体的衍生物． 卜———奇—1 I--．．．．．．．．．．．．-．．．．．．J-．-．．．．．．．．．．一J 0 10 20min 图1 L一苯丙氰酸(·)和D．L一苯丙氯酸衍生物曲)色增圈 ．270． 3．2奎宁浓度对分离选择性的影响 本实验考察了离子对试剂奎宁浓度对D，L．芦．苯丙氮酸光学异构体分离选择性的影 响。 表1 奎宁浓度对保留值和分离选择性的影响 RatioofDichlorometh锄e Acetic Flow Quinine 锄dl‘PentatloI acid rate 《 蛀 Rs 口 !!I!匕! !竺翌!坠! 【型!匕：坠!j !竺!!巴也1 99，l 0．19 5，100 1．8 4．49 5．12 096 1．14 99／l O35 5，100 l 8 4．97 5．57 O．99 I．12 99，l 053 5，100 1 8 470 5．29 100 113 99，l O．73 5，100 1．8 4．73 5．29 1．01 1．12 由表l可见，当奎宁浓度在o．19~o．73mm01，L范围内，在流动相中增加手性离子对试 剂奎宁的浓度，苯丙氨酸对映体衍生物保留值变化不大，分离度变化不大，分离选择性基 本不变。 3．3正戊醇浓度对分离选择性的影响 本实验也考察了正戊醇浓度变化对D，L苯丙氨酸衍生物分离的影响，结果见表2。 表2正戊醇浓度对保留值和分离选择性的影响 R撕oofDiclllomm劬雠e Acetic Flow Quin_mc 蚰dl。P∞ta∞l ∞id ra：cc 爿 如 R 口 !匕!匕2 111坐!些!【堕!匕!匕13