实验七 鸡基因组的PCR-RFLP分析.ppt

实验七 鸡基因组的PCR-RFLP分析 二、实验原理 电荷效应：DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。 分子筛效应：与分子大小及构象有关，由于DNA分子或DNA片段的分子量差别，电泳后呈现迁移位置的差异。 条带类型对应于基因型。 三、实验目的 通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳技术、DNA的分离鉴定及基因型判定方法。 四、实验材料、仪器和试剂 材料：DNA样品 仪器：电泳液、水平凝胶电泳槽、移液器、紫外透射仪、Tip头 试剂 电泳缓冲液(1×TAE)：0.04mol/L三羟甲基氨基甲烷-乙酸(tris-乙酸)，0.01mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA) 溴化乙锭(EB10mg/ml)：100ml灭菌双蒸水中加入1g EB 1%琼脂糖：100ml 1×TAE加入1g琼脂糖 上样缓冲液(溴酚蓝-甘油溶液)：先配制1%的溴酚蓝水溶液与等体积的甘油即可 五、实验步骤 (一)制胶 1.将1.0g琼脂糖加至100 ml 1×TAE缓冲液中，配成1%琼脂糖。琼脂糖在微波炉中加热熔化。灌胶前将琼脂糖冷却至60。C以下。 2.加入5ul溴化乙锭（终浓度0.5ug/ ml ）至熔化的琼脂糖液中混匀，但避免出现气泡。 3.准备好凝胶成型器。 4.将冷却的琼脂糖倾入用凝胶成型器，制备凝胶。 5.在凝胶一侧放入成型梳，将梳子夹在胶上